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　　PDS对二次打击大鼠RAS系统相关基因的影响论文 【摘要】 目的 探讨二次打击时肾素血管紧张素醛固酮系统(RAS)相关基因的变化和应用人参二醇组皂苷(PDS)后对相关基因的影响。方法 利用失血性休克对arker;其他常规化学试剂均为进口或国产分析纯产品。 1.2 实验动物及分组 30只成龄6000型四导生理记录仪上，记录血压。无菌条件下分离股动、静脉，分别插管备用。(2)首次打击：待血压稳定10 min后缓慢自股动脉插管放血，并于15 min内使平均动脉压(MABP)降至40 mmHg，形成失血性休克。(3)首次打击后预治疗：通过股动脉放血的方法使血压在40 mmHg维持60 min后，再自股静脉回输自体肝素化血及至少1倍失血量的盐水，30 min内回输复苏，输液完毕后血压恢复达110 mmHg(基础血压的80%)左右。HLP组经腹腔注射PDS(25 mg/kg体重)，而HL组经腹腔注射等体积的葡萄糖溶液(5 ml/kg体重)。(4)二次打击：10 min后HL组、HLP组经腹腔注射LPS(2 mg/kg)，S组注射(5 ml/kg)生理盐水。 1.4 标本留取 二次打击后6 h，处死动物。留取血清标本，肺组织部分石蜡包埋，部分液氮冻存。 1.5 指标的检测 1.5.1 肺组织中AGT、ACE、AT1、AT2引物序列 见表1。 1.5.2 肺脏组织ACE及AngⅡ免疫组织化学观察 肺脏组织常规切片进行ACE及AngⅡ的免疫组织化学染色，所用抗体为ACE单克隆抗体(1∶800稀释)、AngⅡ多克隆抗体(1∶1 000稀释)(由大阪医科大学金德男博士惠赠)。 1.5.3 血清中AngⅠ及AngⅡ含量的测定 采用放免法测定AngⅠ及AngⅡ的含量，操作步骤严格按照试剂盒说明书(天津市协和医药科技有限公司)进行。 1.6 统计学方法 实验数据采用x±s表示，目的基因及蛋白电泳条带密度值以灰度×面积/参照物的比值表示。采用SPSS11.0统计软件包处理，多组间比较用方差分析，两两比较采用t检验。表1 AT1、AT2、ACE、AGT的引物序列及扩增片段 2 结 果 2.1 各组大鼠肺脏组织中ACE、AGT、AT1、AT2的mRNA表达 如图1所示：与S组相比，HL组ACE、AGT mRNA表达水平明显增高(P 0.01)，HLP组明显低于HL组(P 0.05)。HL组AT1、AT2 mRNA与S组相比无明显差异(P 0.05)。与HL组相比,.freelRNA虽有降低趋势，但无统计学意义(P 0.05)。 2.2 各组大鼠肺脏组织中ACE蛋白的表达 对各组大鼠肺脏组织进行ACE免疫组化染色分析，如图2所示。S组肺组织中ACE蛋白呈微弱表达，且主要位于细胞浆;HL组肺组织中ACE蛋白呈强阳性表达;HLD组肺组织中ACE蛋白呈弱阳性表达;HLP组肺组织中ACE蛋白呈弱阳性表达。 2.3 各组大鼠肺脏组织中AngⅡ的蛋白表达 对各组大鼠肺脏组织进行AngⅡ免疫组化染色分析，如图3所示：S组肺组织中AngⅡ蛋白呈微弱表达，且主要位于细胞浆;HL组肺组织中AngⅡ蛋白呈强阳性表达。HLP组肺组织中AngⅡ蛋白基本呈弱阳性表达。 2.4 大鼠血清AngⅠ、AngⅡ的变化 二次打击6 h检测血清中AngⅠ及AngⅡ的变化，如表2所示：与S组相比，HL组AngⅡ的含量明显升高(P 0.05);与HL组相比，HLP组的AngⅡ的含量均明显减低(P 0.01);而AngⅠ的变化不明显。表2 二次打击6 h后血清AngⅠ、AngⅡ水平 3 讨 论 ALI/ARDS是指在严重感染、休克、创伤及烧伤等非心源性疾病过程中，肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤造成弥漫性肺间质及肺泡水肿导致的急性低氧性呼吸功能不全或衰竭。其病理生理学基础是一种肺部失控的炎症反应，以肺血管内皮细胞及肺泡上皮细胞广泛损伤为其病理特征。临床表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫，肺部影像学表现为非均一性的渗出性病变。目前认为肺内炎性因子和抗炎因子的平衡失调导致ALI的发生发展，内毒素血症在其发生发展过程中扮演着重要角色〔1〕。近年来的研究发现，对SIRS、ALI/ARDS的调控主要是通过对多种炎症介质及细胞因子调节实现的，NFκB是调控炎症反应强弱的核心〔2，3〕，这是由于在细胞因子的基因启动子上均含有NFκB序列，且NFκB的活化可促进它们的表达〔4〕。有研究表明，ALI/ARDS的炎症反应不仅仅通过NFκB的途径，也可通过其他的信号转导途径〔5〕。此外，在机体受到有害刺激后，RAS也被激活。体内有两套相对独立的RAS，肺组织在其中起着极其重要的作用。全身RAS中，ACE激活AngⅠ生成的AngⅡ主要作用在肺血管内皮。另外，肺组织还可通过局部RAS和