SPEHPLC法测定小柴胡片中柴胡皂苷a的含量论文.docVIP

　　SPEHPLC法测定小柴胡片中柴胡皂苷a的含量论文 【摘要】 目的 建立小柴胡片中柴胡皂苷a的含量测定方法。方法 采用HPLC法，以固相萃取进行样品前处理，以Kromasil 5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱；以甲醇水（体积比75∶25）为流动相；检测波长为203 nm。结果 柴胡皂苷a的线性关系良好，回归方程：A=358.09m-7.6102，r=0.9991；平均加样回收率98.2%，RSD为1.92%。结论 采用固相萃取能够有效消除杂质对柴胡皂苷a含量测定的影响；本法操作简便，重复性好.freel，处于紫外末端，在测定时受杂质干扰严重。固相萃取（SPE）是一种新的样品前处理技术，近年来已经应用于中药含量测定方法研究［3-5］，但还未见有将此方法应用于柴胡皂苷a的含量测定的文献报道。本文采用这种样品前处理技术，有效地消除了本品中杂质对柴胡皂苷a测定的影响，保证了测定结果的准确性，具有操作简便，节约时间，回收率高的优点，可用于小柴胡片的质量控制。 1 仪器与试药 Agilent 1100 Series高效液相色谱仪（Agilent Technologies,USA），Agilent Chem Station 4.0 色谱工作站；Supelclean ENVI18 SPE C18小柱（500 mg/3 mL，美国），Satorius 电子分析天平（Sartorius Co.Ltd.Germany）；艾科普纯净水发生器。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯。 柴胡皂苷a对照品（批号：110777-200301，供含量测定用）购至中国药品生物制品检定所。小柴胡片（A厂，070102，070205，070408）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Kromasil 5C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇水（体积比75∶25）为流动相；流速为0.8 mL/min；检测波长为203 nm。理论塔板数按柴胡皂苷a峰计算应不低于5000。对照品图谱、样品图谱、阴性对照图谱见图1。 A.柴胡皂苷a对照品； B.小柴胡片； C.阴性对照 1.柴胡皂苷a 图1 HPLC色谱图（略） Fig.1 HPLC chromatograms 2.2 对照品溶液的制备 精密称取柴胡皂苷a对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，摇匀，即得。 2.3 供试品溶液的制备 取小柴胡片20片，研细，混匀，取约4 g，精密称定，加5%（体积分数）氨水甲醇60 mL，回流提取2次，合并2次提取液，滤过。水浴挥干，残渣加水10 mL溶解，加水饱和正丁醇萃取4次，每次20 mL，合并正丁醇液，加氨试液洗涤2次，每次20 mL，弃去氨洗液。正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，加于已处理好的C18微柱（先用甲醇10 mL冲洗，再用水10 mL冲洗）上，分别用水10 mL，80%(体积分数）甲醇20 mL洗脱，收集80%（体积分数）甲醇洗脱部分，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。 2.4 线性关系考察 精密吸取上述对照品溶液8、10、12、16、20、25、30 μL，注入液相色谱仪，测定。以峰面积(A)为纵坐标，以进样量(m)为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A=358.09m-7.6102，r=0.9991。结果表明，在4.02～15.06 μg 范围内线性关系良好。 2.5 稳定性试验 取同一份供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24 h注入液相色谱仪，测定,结果峰面积的RSD为1.05%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。 2.6 重复性试验 取同一批号（070102）样品6份，按“2.3”项下制备成供试品溶液，进样测定，结果6份供试品含量的RSD为1.04%。表明本法的重复性良好。 2.7 加样回收试验 取已知含量的小柴胡片粉末6份，按照供试品中柴胡皂苷a的量与对照品加入量1∶1的比例加入柴胡皂苷a对照品，分别制备供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。以实测值与对照品加入量计算回收率。结果6份供试品的平均回收率为98.24%，RSD为1.92%，见表1。表明本方法回收率良好。 表1 柴胡皂苷a加样回收试验结果（略） Tab.1 Recovery test of Saikosaponia a 2.8 样品测定 取3批样品，照“2.3”项下制备成供试品溶液后，测定。结果3个批号070102、070205、070408样品所测得的柴胡皂苷a含量分别为0.38、0.51、0.69