花生白藜芦醇合酶cDNA的克隆及其对植物、酵母的遗传转化.pdf

花生白藜芦醇合酶eDNA的克隆 及其对植物、酵母的遗传转化 摘要 和药物中的一种具有保健功能的成份。Res主要具有抗癌，保护心血管，雌激 素调节，抗增殖、诱导细胞凋亡，抗菌等作用。然而，在自然的条件下，Res 在植物体内的含量是非常低的，要用传统的提取方法得到高丰度的Res非常困难， 并且成本较高。白藜芦醇合酶(Resveratrol 径中最后一个起作用的关键酶，也是唯一必须的合成酶，本实验通过分子生物学 手段，得到RScDNA，分别对植物和酵母进行遗传转化，已经取得了如下进展： 利用引物悬挂延伸PCR技术从花生总DNA中扩增出带有Kozak序列的 RScDNA，然后将其重组到克隆载体中。通过测序证明，所获得的RScDNA基 因，与登陆号为AB027606的序列进行比对，同源性达到95％。此序列推测的氨 基酸序列与登陆号为p20178的氨基酸比对，同源性达到98％以上。证明应用引 物悬挂延伸PCR法已经成功得到了花生RScDNA。 构建的植物表达载体转化农杆菌LBA4404，利用农杆菌介导转入花生下胚轴和 胡萝h下胚轴。 氨酸缺陷筛选和PCR筛选，证明目的基因RScDNA已经成功得整合到了酵母的 染色体上。 关键词：白藜芦醇； 白藜芦醇合酶；花生；引物悬挂延伸PCR法 Genetic transformationof and with plantyeast RScDNAfrom cloningpeanut Abstract Res(resveratr01)isakind endotoxin．Itisakind ofplant healthcare function onseveraldozenfoodandoneofmedicine．Res existing mainly hasthefunctionof resisting cardiovascular．regulatinestrogen， cancer,protecting resisting cellto andSOon．Resislowin hyperplasia,leadingdying，antibiotic plant， SOitis and to use withdrawmethodto difficulty costlyonlytraditionally getplentiful Res．ResearchthatRS(resveratrolthe shows synthase)isnecessaryenzyme only andthelast one inthe ofRes this usethe enzyme way synthesizing．Inpaper，we methodofmolecular and and to RScDNA transformation biologyget genetic plant have madethe P