4遗传重组机制重点讲义.pptVIP

5．转座因子 1）玉米籽粒花斑遗传的分子基础； 2)分类：①．原核生物转座因子：插入因子、转座子、Mu噬菌体；②．真核生物转座因子：玉米Ac-Ds系统、Spm控制因子，果蝇的转座因子有Copia， 412与297等；Ty元件； 3）转座的分子机制（逆转录转座、切离和复制转座）； 4）转座的遗传学效应（基因突变或失活、产生新基因、各种突变、同源重组、激活基因、标记基因）； 5）转座的应用（转座子克隆）。 1、转座子的转座有几种形式？转座后会产生哪些遗传学后果？有何应用？ 指出各3种转座形式；3-5种遗传学后果；在基因工程与克隆基因方面的应用 2、Holiday模型是如何解释基因转变的？ 指出异源双链区是关键区域；异源双链区存在碱基差异，由酶修复，关键看模板的确定 3、为什么会出现玉米籽粒的花斑现象，为什么花斑的颜色深浅不同 指出是转座的结果；指出AC-DS系统的作用方式导致C基因的表达或关闭；表达量的持久还是短暂的 * 位点专一性重组过程 attB attP 整合酶Int 切除酶Xis 整合宿主因子(IHF) attB和attP位点处的序列，O序列叫做核心序列，全长15bp，富含AT碱基对，在attB和attP中完全一致。 第四节、转座因子 转座因子理论推翻了经典遗传学关于基因座位是固定的观念，是一种革命性的理论 人们把麦氏的成就比之为一百年前另一位伟大的遗传学家孟德尔的成就。 1983年,美国遗传学家B．McClintock因在发现转座因子方面的重大贡献，被授予诺贝尔医学奖。 1951年，在冷泉港生物学专题讨论会上， McClintock报告了遗传基因可以改变自身位置，她称之为“转座子” 。 转座理论遇寒冬 当时占统治地位的理论认为基因以一定的顺序在染色体上作线性排列，彼此之间的距离非常稳定； 常规的交换和重组只发生在等位基因之间，并不扰乱这种距离； 除了发生频率低的染色体倒位和相互易位等畸变可以改变基因的位置外，人们无法想象基因会从一处跳跃到另一处。 转座理论被接受 上世纪70年代后在生物中发现了更多可移动的遗传因子； 从而麦氏的理论被人们重新提起并得到了验证，80年代初麦氏理论为科学界普遍接受。她走在时代前面四十年，同时也为此冷落奋斗了四十年。 转座因子是可以在染色体内或染色体间(以及细菌染色体与质粒间）改变位置的一段脱氧核糖核酸序列。 目前认为“转座”的命名并不准确。在转座过程中，转座因子的一个拷贝常留在原位置上，在新位点上出现的仅是新拷贝。因此，转座过程实际上是依赖于DNA复制的重组过程。 1940初，McClintock发现这一突变与染色体重组（断裂、解离）有关。 一、麦氏的工作 染色体的断裂、解离(dissociation)有一个特定位点(Ds)；但Ds并不能自行断裂、解离，受一个激活因子Ac(activator)控制，而Ac即可以正常传递，也可以转移座位。 Ds只有在Ac存在时才能移动，McClintock把Ac和Ds称为控制因子或转座因子。 Emerson（1914）发现一种玉米果皮色素遗传特殊突变体--花斑条纹果皮，这种突变可以发生多次突变和回复，原因不清。 在单个胚乳细胞中跳来跳去，形成花斑胚乳 转座因子如果在质粒上，将质粒加热变性，两条链各自复性，会形成茎环结构。 二、转座因子存在的直接证据 三、转座因子的分类和结构 它是一类最小的转座因子，除有转座酶基因外，一般不含其它基因，大小在768~1530 bp； 它们是细菌基因组或质粒DNA的正常组成部分；一个细菌细胞常带有少于10个IS序列。 （一）、原核生物的转座因子 根据分子结构与遗传特性可以分为三类： 1．插入序列（insertion sequence，IS） 虽然IS大小不同，但有共同特征： 在IS两末端都有一段短的反向重复序列（IR），长度不一。 反向重复序列举例： TGAAA ACTTT ::: TTTCA AAAGT 所以，含有IS的质粒经变性后，分别以单链复性，在电镜下出现茎环结构：茎的部分是（ ），大环是（ ），小环是（ ）。 当IS插入靶DNA后，导致在插入片段两侧出现（靶片段）的重复。 2. 转座子（transposon） 含有转座酶基因外，还带抗药或其它基因。 转座子又可以分为两类： ①.复合转座子：IS因子＋抗菌素抗性片段＋IS因子 。 IS因子可以是反向重复构型或同向重复构型。 相同 复合式转座子Tn9的结构 复合转座子中的IS序列既能单独转座，又能带动整个复合体转座。与以下两个因素有关： A、在非选择压力下，两个IS距离越大，IS自身转座的可能性越大，复合转座子转座的频率越小。 B、在选择压力下，复合转座子整体转座的频率会明显增加。 ②.有些转座子末端并不是IS，而是反向重复序