红掌根腐病病原鉴定及其PCR 检测方法.pdfVIP

园 艺 学 报 2013 ，40 （5 ）：989 –996 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 红掌根腐病病原鉴定及其 PCR 检测方法 1 2,* 周晓云 ，游春平 1 2 （广州花卉研究中心，广州 510360 ； 仲恺农业工程学院农学院，广州 510225 ） 摘 要：利用真菌通用引物 ITS1 和 ITS4 扩增红掌根腐病菌转录间隔区并进行序列测定，通过序列 比较，设计了 1 对红掌根腐病菌的特异引物 SF1/SR2，对 30 个红掌根腐病病原菌、8 种其它真菌和 2 种 细菌基因组 DNA 进行 PCR 扩增。结果表明，只有红掌根腐病菌获得 572 bp 的特异带。使用引物 SF1/SR2 对华丽腐霉进行 PCR 扩增，其检测灵敏度在 DNA 水平上可达 1 pg。运用设计的引物从红掌根腐病菌基 因组DNA 以及人工接种和自然发病的红掌植株中扩增到572 bp 的特异片段，实现了对红掌根腐病菌的快 速可靠的检测。 关键词：红掌；根腐病菌；ITS 分析；PCR 检测 中图分类号：S 682.2 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2013 ）05-0989-08 Identification and PCR Detection of the Pathogen Causing Root Rot of Anthurium andraeanum 1 2,* ZHOU Xiao-yun and YOU Chun-ping 1 2 （Guangzhou Flower Research Center，Gangzhou 510360，China；Zhongkai University of Agriculture and Engineering， Guangzhou 510225 ，China） Abstract ：Based on the difference in internal transcribed spacer（ITS ）sequences of Pythium splendens and other Pythium spp.，a specific pair of primers SF1/SR2 was designed. Among 30 P. splendens isolates causing root rot of Anthurium andraeanum ，and other eight fungi and two bacteria species，the primer pair amplified a single 572 bp product from all isolates of P. splendens ，but not from any other isolates tested. The sensitivity of detection of the pathogen P. splendens with primers SF1/SR2 was 1 pg genomic DNA. It could amplified a specific single product from natural infected A. andraeanum plants ，that was not amplified from healthy tissue. The results showed that the PCR protocol provid