第一节病毒的分离与鉴定.docVIP

第一节病毒的分离与鉴定 [授课学时]2学时 [学习重点] 标本的采集、运送及处理的方法和注意事项；病毒分离培养与鉴定的方法。 [基本概念] 1．组织培养：将人或动物离体组织块或分散的活细胞，模拟体内的生理条件在试管或培养瓶内加以培养，使之生存和生长，称为组织培养。目前一般所指的组织培养多指单层细胞培养。 2．原代细胞培养：采用机械或胰蛋白酶等处理离体的新鲜组织器官，制成分散的单个细胞悬液，加入生长液后，分装于培养管中培养，活细胞贴壁生长繁殖，数天后形成单层细胞，称原代细胞培养。 3．次代细胞培养：将原代细胞培养物轻微消化后，再洗下分装至含新鲜培养液的培养管中继续培养，即为次代培养。 4．二倍体细胞株：原代细胞经过多次传代仍能保持二倍体特性，称为二倍体细胞株。 5．传代细胞系：来源于肿瘤细胞或细胞株在传代过程中变异的细胞系，是能在体外无限传代的细胞系。 6．细胞病变效应（CPE）：病毒在细胞内增殖后，由病毒引起的细胞形态学改变，称为细胞病变效应。 [基本要点] 注意学习以下内容： 1．病毒检验的大致程序：临床标本→分离培养→初步鉴定→最后鉴定。 2．标本的采集运送及处理：发病初期从感染部位采集足量标本，低温运送、保存，尽快送检，分离培养前去除标本中的沉渣、细菌、真菌和毒性物质等，必要时需浓缩、提纯。 3．病毒分离培养方法：包括组织培养、鸡胚接种、动物接种。 4．根据细胞的来源、染色体特性及传代次数，细胞培养可分为三种类型：原代和次代细胞培养、二倍体细胞株、传代细胞系。其中传代细胞系的增殖特性类似于恶性肿瘤细胞，可选择性地用于病毒的分离、鉴定等研究。 5．鸡胚接种常用于粘液病毒、疱疹病毒、痘类病毒等的原代培养，也可选择性地用于疫苗生产。根据病毒种类的不同，接种病毒的部位也各异，包括鸡胚尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种和绒毛尿囊膜接种。 6．动物接种分离病毒需要选择敏感动物及合适的接种部位。 7．病毒的初步鉴定依据：动物感染范围及潜伏期、对鸡胚的敏感性、细胞形态变化类型、红细胞吸附、病毒干扰现象、血凝性质、理化性质（核酸类型测定、大小形态、乙醚敏感试验、耐酸试验） 8．病毒的最后鉴定依据：主要是血清学方法（中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验）和分子生物学方法。 9．分离病毒的病原学意义 （1）从人体组织、脑脊液、血液、眼部、水泡液分离到任何病毒均可认为具有高度病原学意义。尿液中检出病毒也具有病原学诊断意义。 （2）从呼吸道、阴道、肠道标本分离病毒的病原学意义需要考虑这些病毒是否有无症状携带者和长期排毒者。如果同时从同一病人的多个部位分离到同一种病毒，其病原学意义较大；如果仅从某种标本分离到病毒，病原学意义则较小。 （3）分离培养呈阴性结果时，应考虑细胞的敏感性、是否有细菌或真菌的污染、是否接种量或病毒含量过低等。 （4）结合恢复期血清滴度与急性期血清滴度之比值判断所分离到的病毒与某一特定疾病的关系。