大鼠视觉发育可塑性关键期内视皮层突触发育和LTP特性的研究.pptVIP

大鼠视觉发育可塑性关键期内视皮层突触发育和LTP特性的研究 高朋芬1 阴正勤1 刘应兵2 王仕军1 范惠民1 1第三军医大学西南眼科医院 2华西医科大学生理教研室 前 言 儿童弱视的发生发展与视觉发育可塑性过程密切相关 视皮层突触的长时程增强（ LTP ）现象被认为可能是视觉发育可塑性的突触机制 Kirkwood (1994)应用脑片膜片钳技术研究视皮层LTP，使视皮层LTP的研究从细胞外深入到细胞内和细胞膜上离子通道水平 本研究采用低频刺激伴随突触后去极化及脑片膜片钳技术研究大鼠视觉发育可塑性关键期内视皮层LTP与生理年龄、视觉经验的关系 三、视皮层LTP的诱发和记录 1、参数设置 刺激强度：引起可见EPSCs最低强度的2倍 去极化幅度：-20mV 去极化持续时间：300ms×(60~90) 2、判断LTP的标准： 第二次测试刺激所致EPSCs波峰在至少20min内始终大于条件刺激前测试刺激所致EPSCs波峰的120% 。 四、视皮层神经元形态观察 0.5% biocytin 免疫组化染色 五、统计学分析 SPSS软件 卡方检验，t检验，方差分析 一、不同周龄组大鼠视皮层突触发育特性的研究  概述 共记录到198个神经元的PSCs 1周龄组51 2周龄组58 3周龄组51 4周龄组38 无反应型细胞比例： 1周龄组明显高于2、3、4周龄组(P0.01)，2、3、4周龄组之间无统计学差异P0.05 一周龄组IV层无反应型细胞比例显著高于II/III层（P0.05），而其它周龄组各层次间无显著差异 多突触型细胞比例：1、2、3、4周龄组分别是7.69%、18.75%、26.53%、22.22%，各组间相差不显著 随着大鼠周龄增加，静息膜电位逐渐变负，EPSCs的峰值(Peak value) 逐渐增大，EPSCs10-90%下降时间（反映突触后复极化时间）、半波宽度(Half-width ) 逐渐增大，输入阻抗逐渐减小 1周龄组分别与2、3、4周龄组比较，差异非常显著(P0.01)或显著(P0.05)；但2、3、4周龄组之间无显著性差异 视皮层神经元LTP诱发概况 实验例数：有反应型细胞76例 诱发出LTP例数：30例 LTP最早诱发天龄：P4d ，Ⅱ/Ⅲ 1、不同周龄组大鼠视皮层LTP诱发率比较 1周龄组LTP诱发率最低(3/14)，2周龄组略有上升(9/29)，3周龄时各层次LTP诱发率达到最高(11/19)，4周龄时开始略微下降(7/14) 睁眼前组(1、2周龄)43例细胞共诱发出LTP 12例，诱发率为27.91%；睁眼后组(3、4周龄)33 例细胞中共诱发出18例LTP，诱发率为 54.55％ 睁眼后组LTP诱发率显著高于睁眼前组(P0.05) APV处理后LTP的诱发率低于非APV处理组，相差非常显著(P0.01) 睁眼前组(1、2周龄）中APV处理组与非APV处理组之间无统计学差异；睁眼后组(3、24周龄）中APV处理组与非APV处理组之间差异显著(P0.01) 3、APV对1例P14d锥体细胞LTP的作用（LTP持续时间达110分钟） 本实验发现：不同组别大鼠视皮层PSCs各项指标的差异主要体现在1周龄组与其它3组之间，即生后2周（睁眼前）大鼠视皮层PSCs各项指标已达睁眼后水平。 以往形态学研究：大鼠视皮层细胞树突棘数目激增发生在睁眼后。 提示：视皮层非特异性突触功能的建立优先于突触结构的发育。 LTP诱发率与大鼠视觉可塑性关键期吻合，提示LTP反映了视皮层经验依赖可塑性 睁眼前、后LTP诱发率的显著差别，提示形觉刺激大大增强了视皮层突触可塑性 本实验发现，APV可逆性阻断了大多数视皮层LTP，初步证实了视皮层LTP对NMDA受体的依赖性。 有4例视皮层Ⅳ层水平联系突触的LTP不受APV的影响，提示这种LTP不依赖于NMDA受体，而依赖于其它来源的Ca2+内流增多，其性质有待于进一步研究。 * * 材料和方法 一、实验动物 健康Wistar大鼠52只，分组: 1周龄组（P0~7d）13只 2周龄组（P8~14d）14只 3周龄组（P15~21d）15只 4周龄组（P22~28d）10只 二、视皮层全细胞记录 结 果 无反应型 单突触反应型 多突触反应型 1、不同周龄大鼠视皮层无反应型细胞比例 2、不同周龄组大鼠视皮层神经元PSCs各电生理指标比较 二、不同周龄组大鼠视皮层神经元LTP的研究 2、APV对睁眼前、后大鼠视皮层LTP的影响 讨 论 一、视皮层突触功能发育特性 二、不同周龄及视觉经验对视皮层LTP的影响 三、视皮层LTP与NMDA受体的关系 * * Sheet3 Sheet2 Sheet1 图表1 S