快速线扫描拉曼成像技术在研究CaSki细胞凋亡过程中的应用.pdfVIP

Vol-37 高等学校化学学报 No．7 2016年7月 CHEMICALJOURNALOFCHINESE UNIVERSrnES 1257—1261 快速线扫描拉曼成像技术在研究CaSki 细胞凋亡过程中的应用 张金亮，马 鑫，徐梦溪，宗铖，任斌 (厦门大学化学化工学院，固体表面物理化学国家重点实验室，厦门361005) 摘要应用快速线扫描拉曼成像技术研究了在抗肿瘤药物顺铂诱导下宫颈癌CaSki细胞凋亡过程中细胞色 素c、蛋白质和脂质等的时空变化规律．结果表明，细胞色素c与蛋白质的相对拉曼峰强可以反映细胞凋亡 程度．与常用的表征细胞活性的噻唑蓝(MTY)实验的统计方法相比，利用拉曼成像技术可以更灵敏地观察 到细胞凋亡早期生物活性分子的变化，从而在单细胞水平检测细胞凋亡过程，为解析药物与细胞的作用机 制提供分子水平信息． 关键词宫颈癌；细胞色素c；凋亡；拉曼光谱；拉曼成像；噻唑蓝法 中图分类号0657．37；0644文献标志码A 癌细胞的凋亡是大量胞内分子同时参与的复杂过程．从单细胞水平上研究癌细胞在药物作用下的 凋亡过程将有助于认识药物与癌细胞作用机理，对高效治疗癌症具有重要的科学意义．但目前从单个 活细胞和单分子水平上探究生命问题对于传统生物医学手段仍是一个巨大的挑战，对癌细胞凋亡过程 的分子动态时空演变信息仍然了解甚少． 近年来，流式细胞术、扫描探针显微技术和荧光显微术等单细胞技术发展较快，其中流式细胞术 可以实现单个细胞快速高通量的生物学分析，获得细胞的物理化学特性，但缺乏空间分辨的信息¨。]． 扫描探针显微技术不仅可以研究单个细胞膜表面微结构的形貌信息，还可以对胞内相关细胞器进行分 子水平上的操作，但是会对细胞产生应力，影响细胞的正常生理功能[4]．荧光显微技术为在单细胞水 平上研究细胞生物学过程提供了丰富的信息，也是目前单细胞研究的主要方法，但荧光技术需要借助 外来标记分子，会对细胞的微环境以及被标记分子的功能产生一定的干扰，难以如实反映生物分子的 本征信息，特别是对一些重要的生物活性分子，如小分子和脂类等尚难以进行荧光标记而不影响其生 物学活性；此外，荧光峰通常较宽，难以同时实现多组分检测【5’7 J．拉曼光谱技术不会发生生物分子 光漂白，适合长时问对活体样品进行检测；无需标记即可获得体系的指纹特征，排除了标记分子对生 物体系的干扰甚至破坏；其光谱特征由分子自身振动特征决定，不易受外界干扰；谱峰窄，可以进行 多组分同时检测．因此，拉曼光谱能够同时获得整个细胞的光谱信息，对研究细胞内多种分子同时参 与的凋亡过程具有显著优势． 宫颈癌是全球女性的第二大癌症杀手，根据其携带的人类乳头瘤病毒的型号，宫颈癌细胞可分为 前认为顺铂与癌细胞的作用机理主要有2种：一种认为顺铂与细胞核内DNA的碱基形成络合物，阻止 DNA的解旋、复制等过程，从而抑制癌细胞的增长¨¨18o；另一种认为顺铂可以诱导细胞内产生活性 氧，从而诱导细胞凋亡¨”引． 本文选择宫颈癌CaSki细胞作为研究的细胞系，运用快速线扫描拉曼成像技术对顺铂作用后的 CaSki细胞的凋亡过程进行实时监测．通过拉曼成像分析对活细胞内生物分子如细胞色素c、蛋白质、 收稿日期：2016-04-20．网络出版日期：2016-06-27． 基金项目：国家重点基础研究计划项目(批准号：2013CB933703)资助． 联系人简介：任斌，男，博士，教授，主要从事拉曼光谱、电化学和单细胞研究．E-marl：bren@XlllU．edu．ell 宗铖，男，博士，主要从事拉曼光谱、电化学和单细胞研究．E-mail：czong@mU．edu．ca 1258 高等学校化学学报 V01．37 脂质等的含量和分布进行了分析，从而获得细胞凋亡过程的分子信息，为顺铂抗肿瘤机理的研究提供 分子水平信息． 1 实验部分 1．1试剂与仪器