磁珠法-核酸提取新篇章-培训课件.ppt

临床疾病诊断：人类的很多疾病和基因密切相关，白血病、地中海贫血、肾衰竭等都能用基因技术进行分型检测，再寻找合适的供体进行移植治疗；叶酸代谢能力基因检测；DNA亲子鉴定；胎儿性别检测 动物疾病检测：布鲁菌病（brucellosis，布病），也称波状热，是布鲁菌引起的急性或慢性传染病，人畜共患病。 科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。 应用行业： 各级各类医疗机构、疾病预防控制中心、血站、大学及研究所、兽医站等。 全血试剂盒 病毒试剂盒 能够从血清、血浆等多种病毒样品中（如HBV、HPV、HCV ），高效提取和分离病毒总DNA或RNA，也可适用于组织细胞或分泌物样本中的病毒总核酸，提取产物可以直接用于下游应用，如荧光定量PCR或定量逆转录PCR等。 1. 生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应，可高效核酸提取，满足微量生物样本核酸提取的要求。 2.不使用酚、氯仿、异戊醇等有毒试剂，安全无毒，绿色环保。 3.生物磁珠能够通过仪器进行自动化操作，满足数据库建设对大批量样本提取的需要，减少人为因素 4.用时少，操作简单，适用于大多数生物检材。 5.全自动核酸提取最大限度地减少了操作人员与检测的接触，可有效保护实验操作人员。 优点 磁珠法—核酸提取的新篇章 洛阳惠尔纳米科技 狄光辉Q:625006192 核酸提取方法进展 核酸抽提是下游核酸检测、研究或产品开发的起点，所分离的核酸的质量和完整性直接影响研究或诊断结果，因此核酸抽提是分子生物学最关键的方法之一。 成功的核酸分离纯化需要四个重要步骤：组织或细胞的破碎和裂解，核蛋白复合体的变性，核酸酶的灭活以及污染物的去除。 传统核酸提取方法 酚--氯仿抽提法 碱抽提法 CTAB抽提法 纤维素膜层析法 核酸固相抽提法 市场上大多数商业核酸抽提试剂盒采用固相抽提法。相对于传统方法，固相抽提更快速和高效。它解决了许多液--液抽提存在的诸多问题，如分离不完全等。 固相抽提方法的支持物主要有硅胶、玻璃颗粒、阴离子交换树脂、磁性颗粒。固相抽提包括细胞裂解、核酸吸附、漂洗和洗脱四个关键性的步骤。 提取原理 首先，基于碱裂解法使细胞膜破裂，以及组蛋白变性，释放核酸。 然后，将经裂解液处理的样本转移到固相支持物上，在结合液 的帮助下靶核酸被吸附到支持物上。 蛋白质等其他化合物也可与支持物表面发生结合，但通过目的性 洗涤过程可以被除掉。 最后，以TE缓冲液或蒸馏水将纯净的靶核酸从支持物上释放下来。 离心柱法提取DNA 集液管 纯化柱 硅胶滤膜 磁珠法提取DNA 裂解 使核酸游离出来 结合 加入磁珠，使核酸与其结合 洗涤 洗去残留杂质 洗脱 将核酸从磁珠中分离出到溶液 纯化 分离磁珠，得到高纯度核酸溶液 比较（以全血为例） 样本量 洗脱液量 OD260/280 浓度 离心柱法 200 -400 μl 100 μl 1.7-1.9 3-10 μl 磁珠法 150 -200 μl 100 μl 1.7-1.9 30-70 μl 离心柱法产品效果图 磁珠法产品效果图 离心柱法 磁珠法 适用范围 新鲜血液或经抗凝剂（EDTA、柠檬酸）处理后的冷冻血液 同前 操作环境 室温环境进行 室温环境进行 裂解原理 碱裂解法 改良的碱裂解法 吸附核酸 硅胶滤膜 包被活性基团的磁珠 离心 需多次离心 不需离心，依靠磁分离 纯度 较高，可直接用于PCR、酶切、Sourthen等下游实验 较高，可直接用于PCR、酶切、Sourthen等下游实验 产量 较低 较高 自动化抽提 不能进行自动化提取 能够和核酸自动提取仪配合实现自动化提取 用时 50-60 min 30-40 min 价格 较低 略高 主要厂家 罗氏，百泰克，天根， 生工 Thermo，罗氏，ABI，gene-mag，惠尔 核酸自动化抽提系统 自动化抽提系统是可高通量地处理样品、有助于简化分离步骤的一种大型、复杂的仪器操作系统。 自动化提取的优点有：减少人为工作时间，降低人力成本、增加工作者的安全性以及提高结果的可重复性和质量。 核酸自动提取仪 磁棒 深孔板 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B C D E F G H 裂解 洗涤液Ⅰ 洗涤液Ⅱ 洗涤液Ⅱ 磁珠 洗脱 裂解 洗涤液Ⅰ 洗涤液Ⅱ 洗涤液Ⅱ 磁珠 洗脱 磁珠法核酸提取的核心是生物磁珠，是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点。 生物磁珠的介绍 1 硅基磁珠 1、一种是针对含有常规量核酸的样本进行提取。如动植物、种子、细菌、质粒等； 2、一种是针对含有痕量核酸的样本进行提取。如血清病