双歧杆菌DNA对小鼠巨噬细胞中PKC和NF论文.docVIP

　　双歧杆菌DNA对小鼠巨噬细胞中PKC和NF论文 .freel DNA on PKC and NFκB in murine macrophages Abstract AIM: To explore the influence of DNA of bifidobacteriua adolescence on PKC and NKκB of murine macrophages. METHODS: The fluorescent intensity of PKCα、 PKCβI、 PKCβII、 PKCγ、 PKCε and PKCζ in murine peritoneal macrophages icroscope. The density of NKκB+ macrophages munocytochemical staining. RESULTS: The average fluorescent intensity of PKCα and PKCβII produced by mouse peritoneal macrophages in bifidobacterium DNA injection group arkedly higher than that in control group（P 0.01）. There acrophages in bifidobacterium DNA injection group arkedly higher than that in control group（P 0.01）. CONCLUSION: DNA of bifidobacteria adolescence could activate macrophages by promoting the activity of PKCα、 PKCβII and NFκB. Key DNA; macrophage; protein kinase C; nuclear factorκB 摘 要 目的: 探讨青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞中6种PKC和NFκB的影响。方法: 通过激光共聚焦显微镜观察小鼠腹腔巨噬细胞中PKCα、 PKCβI、 PKCβII、 PKCγ、 PKCε和PKCζ的荧光强度, 以免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞中NFκB+细胞的密度。结果: 双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞中, PKCα和PKCβII的平均荧光强度明显高于对照组（P 0.01）; 而PKCβI、 PKCγ、 PKCε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则无统计学意义（P 0.05）。双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞中, NFκB+细胞的密度显著高于对照组（P 0.01）。结论: 青春型双歧杆菌的DNA可通过活化PKCα、 PKCβII和NFκB来激活巨噬细胞。 关键词双歧杆菌DNA; 巨噬细胞; 蛋白激酶C; 核因子κB 双歧杆菌是人体和动物肠道内数量最多的生理性厌氧菌, 能调节肠道的微生态平衡, 也有抗肿瘤、 抗感染和免疫激活等多种重要的功能1。目前研究发现, 双歧杆菌的DNA中含有非甲基化的胞嘧啶磷酸鸟嘌呤基序(cytidinephosphateguanosine, CpG DNA), 可作为免疫刺激序列(immunostimulatory sequence)激活树突状细胞(DC),.freela公司产品。其他生化试剂均为进口或国产分析纯。 1.2 方法 1.2.1 菌种来源及其培养 双歧杆菌由本室从健康婴儿粪便中分离培养获得, 经API20A及TAB系统和多次生化反应鉴定为青春型。实验时, 将双歧杆菌接种至硫乙醇酸盐肉汤中, 置厌氧培养箱, 于37℃培养72 h。将含菌培养液以3000 r/min离心10 min, 去上清, 沉渣以PBS液洗3次, 并调整细菌数为1×1013/L。 1.2.2 双歧杆菌DNA的制备和鉴定 将双歧杆菌接种于硫乙醇酸盐肉汤中, 置厌氧培养箱中于37℃培养72 h。收集细菌, 加入溶菌酶（1 g/L）与SDS（终浓度为10 g/L）裂解菌体后, 用饱和酚抽提去除菌体蛋白并透析。用紫外分光光度计测定所提取的双歧杆菌基因组DNA的A260/A280为1.976。测定DNA的浓度后, 经薄板层析证实,所制备的双歧杆菌DNA中无脂多糖存在, 冷冻干燥后备用4。 1.2.3 实验分组及双歧杆菌DNA的处理 实验动物分为两组, 即(1)双歧杆菌DNA注射组: 20只小鼠, 于实验的第1天向小鼠腹腔注射100 g/L硫乙醇酸盐肉汤2 mL, 第2天起腹腔注射双歧杆菌DNA 0.2 μg, 每天1次, 连续5 d。 (2)对照组: 动物的数量及第1天的处理措施均同双歧杆菌DNA注射组, 不同之处为第2天起向