毛竹苯丙氨酸解氨酶基因cDNA全长的克隆及组织表达分析.pdfVIP

第四届中国竹业学术大会论文集 第二部分 竹子生物学基础研究 毛竹苯丙氨酸解氨酶基因cDNA 全长的克隆及组织表达分析 1 2 * 1 1 高志民 ，彭镇华 ，李雪平 , 牟少华 （1.国际竹藤网络中心，国家林业局竹藤科学与技术重点开放实验室，北京 100102 ；2. 中国林业科学研究院林业研究所， 北京 100091 ） 摘要：苯丙氨酸解氨酶(PAL)作为植物次生代谢关键酶之一，在植物的生长发育和抗逆反应中都 发挥着重要作用。采用RT-PCR 及RACE 方法从毛竹中克隆了一个苯丙氨酸解氨酶基因，命名 为PePAL1 ，GeneBank 注册号为FJ195650 。PePAL1 全长2436 bp ，编码一个701 aa 的蛋白。 序列一致性分析表明，在氨基酸水平上 PePAL1 与水稻的P14717 、玉米的NP_001105334 、甘 蔗的ABM63378 、绿竹AAR24505 的一致性都在75% 以上，其中与P14717 的一致性高达93% 。 系统进化树分析表明，PePAL1 与OsPAL 亲缘关系较近。RT-PCR 结果显示，PePAL1 在叶片、 叶鞘、幼茎和根中均有表达，其中在幼茎中的表达丰度最高。 关键词：毛竹；苯丙氨酸解氨酶；克隆；组织表达 苯丙烷类代谢途径是生物是植物代谢中一条非常重要的途径，一切含苯丙烷骨架的物质都是由这一 途径直接或间接生成。苯丙烷类代谢可生成类黄酮、木质素等多种次生代谢产物，这些次生产物在植物 的生长发育、抗病、抗逆反应中起着重要的作用(欧阳光察等，1988；贺立红等，2006) ，而苯丙氨酸解 氨酶(Phenylalanineammonia-Lyase, PAL)是连接植物初级代谢和苯丙烷类代谢、催化苯丙烷类代谢第一步 反应的酶，是苯丙烷类代谢的关键酶（李莉等, 2007 ）。分离编码苯丙氨酸解氨酶的基因，分析基因的结 构与表达特性，将有助于深入了解苯丙氨酸解氨酶的表达调控机制。 近年来，越来越多的研究集中在苯丙氨酸代谢途径关键酶方面（马俊彦等,2007 ），以期通过调节这 些酶的表达活性，来实现有效地调节与之相应的次级代谢产物的生物合成，培育出适合人类生产生活需 要的植物新品种，如适于造纸的低木质素含量树种、高异黄酮含量的大豆品种等。竹子作为我国重要的 森林资源，由于竹材具有强度高、韧性好、硬度大等不同于其他木材的特点，如今在建筑、造纸、装饰 材料等领域得到广泛的利用（江泽慧，2002 ）。毛竹是我国重要的经济竹种，以毛竹为材料进行PAL 基 因的研究，对于更好地开发利用毛竹资源具有重要的现实意义。本研究采用RT-PCR 及RACE 方法从毛 竹中克隆了PAL 基因cDNA 全长，并对其进行了相关分析和组织特异性表达研究。 1 材料与方法 1.1 实验材料 2007 年10 月用购自广西省柳州地区的毛竹（Phyllostachys edulis ）种子进行播种，在国际竹藤网络 中心培养室培养成实生苗盆栽于直径为15 cm 塑料盆中，培养介质为混合土（腐殖质土：蛭石=7:3 ）。培 养条件为25 ℃，每天光暗培养时间为16 hr/8 hr。2008 年3 月取新鲜材料，用于RNA 提取。 1.2 总RNA 提取与cDNA 合成 采用Invitrogen 公司的Trizol reagent 提取毛竹新7鲜材料的RNA （Gao, et al., 2006 ），用Promega 公 司的反转录试剂盒合成cDNA 。采用Clontech 公司的SMARTTM RACE 试剂盒合成3′cDNA 和5′cDNA 。 1.3 基因的克隆与测序 根据已知苯丙氨酸裂解酶基因序列设计保守区扩增引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合 资助项目：国家林业局948 项目（2005-4-38 ）；国家林业局重点项目（2007-1 ）；国际竹藤网络中心基本科研业务费专项资 金（06/07-A03 ） *彭镇华为通讯作者. 69 第