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橘青霉中全局性调控基因PciveA的克隆鉴定及其特性的初步研究论文
目 录
摘!要．………．…………．…………．…………．…………．．．…．………．…………．……．…．…．………．．…．…．I
ABSTRACT…………………………………………………………………………………………………．．III
第l章文献综述……………………………………………………………………．1
1．1丝状真菌研究进展……………………………………………………………．．1
1．1．1丝状真菌物种多样性和次级代谢产物多样性…………………………。1
1．1．2丝状真菌次级代谢产物分类情况………………………………………。2
1．2丝状真菌调控因子研究………………………………………………………．．3
1．2．1丝状真菌调控因子类别…………………………………………………．．3
1．2．2丝状真菌中全局性调控因子LaeA的研究进展…………………………．4
1．2．3丝状真菌中全局性调控因子VeA的研究进展…………………………．．4
第2章绪论…………………………………………………………………………11
2．1他汀类药物的研究意义………………………………………………………11
2．2本实验的研究目的和意义……………………………………………………11
第3章橘青霉全局调控基因PCI．VEA的克隆与鉴定……………………………13
3．1实验材料………………………………………………………………………13
3．1．1菌株与载体………………………………………………………………13
3．1．2培养基……………………………………………………………………13
3．1．3主要试剂…………………………………………………………………13
3．1．4酶、试剂盒、引物…………………………………………………………13
3．1．5主要使用仪器……………………………………………………………．14
3．2实验方法………………………………………………………………………．14
3．2．1菌种保藏…………………………………………………………………．14
3．2．2菌种液体种子培养和摇瓶发酵培养方法………………………………15
3．2．3总RNA及基因组DNA的提取…………………………………………15
3．2．4紫外分光光度法检测总RNA含量……………………………………l5
3．2．5
Pci．yea中间片段的扩增…………………………………………………15
3．2．6 Pci—yeA 5
3’端快速扩增(RACE技术)…………………………………1
3．2．7快速扩增PcveA
5’端序列(1mL．PCR)………………………………．16
3．2．8克隆Pci．yea基因全长…………………………………………………。17
3．2．9橘青霉Pci．yea的生物信息学分析……………………………………．．18
3．3结果与分析……………………………………………………………………．18
3．3．1 8
M2RNA的提取情况………………………………………………………1
3．3．2橘青霉Pci-veA的核心序列克隆…………………………………………．18
3．3．3Pci．yea
3’端的扩增………………………………………………………．．19
Pci．yea
3．3．4 5’端的扩增………………………………………………………。20
3．3．5
Pci．yea的全长扩增………………………………………………………．．21
3．3．6橘青霉Pei．yea的基因序列分析、蛋白特性和同源性分析…………。2l
第4章PCI．VEA在橘青霉不同生长阶段表达情况研究…………………………23
4．1实验材料………………………………………………………………………23
4．1．1菌株………………………………………………………………………………………………．23
4
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