探讨生物材料对骨髓间质干细胞成骨分化效率之影响.PDF

探討生物材料對骨髓間質幹細胞成骨分化效率之影響 研究者：高子甯 許芳瑜 陳莉蓁 指導者：林泰元教授 李宏孝老師 摘要 本實驗之目的在利用骨髓間質幹細胞 (Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells, BMSCs) 培養為平台，篩選能提升 BMSCs 成骨分化效率的生物材料。實驗中利用 osteogenic in- duction medium (OIM)使 BMSCs 朝成骨分化路徑進行，分別在第 7(前期) 、14(中期) 、21(後 期)天作 Alizarin Red Stain assay(ARS assay)測定鈣沉積之效率作為評估標準，而後於平面 上塗覆不同生物材料進行測試，根據實驗結果顯示，Gelatin 主要在中期就可達到最高成 骨分化效率，而 PCL 與 HA 到後期亦能顯著提高成骨分化效率 。當進入3D 立體成骨誘 導試驗時，我們發現 Gelatin 、HA 的複合材料能保持平面之特性且結合二者優點，並且 更能有效提升成骨分化之效率。 The purpose of this experiment is to employ Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells’ (BMSCs) culturing as a platform to select the biomaterial that could enhance their efficiency in osteogenesis. In this experiment, we use osteogenic induction medium (OIM) to induce BMSCs osteogenesis. Analyses and evaluations of the calcium-rich deposits are made on day7 (earlier stage), day14 (middle stage) and day21 (later stage) by Alizarin Red Stain assay(ARS assay). Then the experiment is done with different biomaterials coating on a flat surface. The data indicates that Gelatin primarily enhances the efficiency of the middle stage of BMSCs osteogenesis, while PCL and HA enhance its later one. During the 3D scaffold experiment, we discover that the composite scaffold of HA and Gelatin can maintain their coating characteristics and combine their advantages. Moreover, it can more significantly enhance the efficiency of osteogenesis. 壹、研究動機 臨床上骨骼傷害需長時間癒合，通常要半年以上才能長出新的骨骼，並且還 要有一定的立體結構強度以支撐身體重量。而幹細胞一直是熱門的再生醫學研究 議題，利用幹細胞可以培養出適合病人的組織器官。因此，我們思考是否能操縱 變因加快分化速率，讓病患不只能接受適合的組織器官，還能加速其復原速度？ 過去的研究顯示骨髓間質幹細胞具有多向分化潛能，可分化為成骨細胞、脂 肪細胞與軟骨細胞等，在適當的誘導條件下可使其朝成骨細胞分化，並且有動物 實驗證實移植骨髓間葉幹細胞確實能促進組織的修復與再生，可應用於骨質再生 及骨骼組織工程，然而尋找適當的條件以增加骨質生成之效率仍有待進一步的探 討，因此我們決定以其作為研究材料。至於變因的部分，我們取生