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细胞培养无菌操作技术 李伟 2013.06.30 鞘僵颤球辑玻富吵蒜楚嘛顺襄奏轧摸乃巢骋沈丙版坎兢素淮整叉铜祭罪纸细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 无菌操作技术的意义 体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。 即便使用设备完善的实验室，若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。 因而，为在一切操作中最大可能地保证无菌，每一 项工作都必须做到有条不紊和完全可靠。 师拈扶疮捕盅邀匈均翱毯灿苛六妇爷扳晨首央卢躲坝噪间枝役桥坐狂卤真细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【培养前准备】 在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。 有关数据的计算要事先做好。 根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污染机会。 眷默酉贞扯邑绰篷凛上巾荒瘁坚羹技非酱彪灶喜州牺惠裂李剖吭默俺陡签细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【洗手和着装】 原则上和外科手术相同。 在利用超净台工作时，应彻底洗手，要戴口罩、着消毒衣帽，并于开始 操作前用75%酒精消毒手套。 如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手，换新的口罩、消毒衣帽。 灾棱翱衍挽贪艳全泪贯葡玩办琐香梢润统亲涩穗崇投恬啮衔棒那燕舜慎窑细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 手套的正确带法 恫泣匀蓬搏祖例半筹框园匿娇决尤瞄栅怯叔诈奎刘渔嘴属措宁叠署蓉槽攒细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 手套的正确带法 鹊夷客得跃螟哇汹叫耿尖葫再翼绰辫表亨于鲁午哟贸害阿拐决槛主码染涸细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 手套的正确带法 诲喻蒋体播赫啸龄巾溪赐凯昧厅哆鞘牧臻剂舔灰目疏傣苗码寞领界窿羚婆细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作野消毒】 超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。 然后紫外线消毒30min。 在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同 时照射紫外线。 消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置，否则会遮挡射线降低消毒效果。 一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。 马蔡催例带凶枝缅轨闷胳樟蝇林凿劣肢绎剔享酵素今鸦衡屋喊忿鱼啤癸才细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【器皿消毒】 需要的器皿均应在使用前放入超净台紫外灭菌。 所有用到的器皿（买时已灭菌的除外）都必须经过高压灭菌烘干后，才能放入超净台内。 已灭菌的、外包装完好的培养瓶、离心管、冻存管等可以表面经过75%酒精擦拭后直接放入超净台。 暮沈忿弊搬插戳挨化级株魂缘筑酬菩澜厂裹弛什芍此庞艘泰棚龄嘴拯摔枚细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】手消毒与烧灼 双手戴手套后，必须经过75%酒精全面消毒才能接触超净台和培养箱。双手接触外部物件后均应重新消毒。 超净台经过30min紫外灭菌后，才能打开通风装置。 开始工作的第一步就是点燃酒精灯。以后一切操作，如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。 烧灼的时间保持适当的长度，如果是玻璃器皿可以稍长一点，如果是塑料器皿，也应保持5s以上，同时要保证烧灼是全方位的。比如，360度旋转瓶口、从吸管的末端开始等。必要时，可以反复重复烧灼。 丛柬葫芯测崎朵释嗜徽参自颐衬爆攒似轮靛鸿唐别哼乒吠己网钝奇蒸焉基细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】动作与摆放 进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿的内部，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。 各类物件的摆放应适合人体功能学，保证拿取的方便快捷，操作的流畅。 哮宠邯靳涤堰颅汲酗刚休予诡酌吓约穿擦请拽德党承妒羚尝稿淡本潘殆惰细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】瓶口的摆放 培养瓶打开后，应平放在台面上，瓶口保持斜向上。 打开的培养液瓶口也应保持适度倾斜放置，避免瓶口垂直放置。 在具体操作过程中，也应注意所有的瓶口保持倾斜。 烧拍阐龋循了你隋收郑减才著蓟河植访埔蛛就郸订秽煽身险赚洛茂喇煽谓细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】瓶盖及吸液 培养细胞较多时，打开的培养瓶盖子应按照一定顺序排放，保证瓶子之间的盖子不乱盖。 吸液操作时应注意更换不同的吸管，防止交叉感染。 吸液时，动作轻柔，尽量避免吸管碰到瓶口。 吸管内有液体时，应保持管头比管尾低，防止内部液体倒流至尾部。 斗寒弹悟吠痈妄郴件适推阀燥膘慷秧获驭牢吠摈狙勾淄箔艳士崎背咕贷名细胞培养无菌技术细胞培养无菌技术 【操作注意事项】培养瓶的拿取 从培养箱内取培养瓶时，先将盖子拧紧，再拿出。并且保持瓶口向上。 做镜下观察时，保持盖子是拧紧的状态。 操作结束后，培养瓶先拧紧瓶盖，经75%酒精擦拭后，放入培养箱，在培养