DNA取简便方法.docVIP

水稻DNA小样的提取(CTAB法) 取一片水稻新鲜叶片(最好为新拙出叶，长6-8cm)，加入700ul1.5ⅹCTAB研磨，磨好后倒入1.5ml离心管中，盖盖，冰上放置。 将研磨好的样品置于管架上，在656℃水浴30min，每隔5min摇动一次。 取出管架，每支离心管加入等体积氯仿，缓缓摇动10-15min。 10000rpm离心5min。 吸取上清液至一新离心管中，加入2倍体积预冷的95%乙醇，置于-20℃沉淀15min。 12000rpm离心15min。 倒掉上清液，倒立于吸水纸上凉干。 加入75%乙醇400ul，浸泡沉淀5min(或10min并离心5min)。 倒出上清液，将离心管风干。加入50ulTE缓冲液(1/10，PH8.0)溶解DNA。置于 4 ℃过夜，待 DNA 溶解后，检测 DNA 浓度及质量。 注意事项： 1．尽量取材幼嫩叶片，如太老，酚类物质多，必须用 10 mM 的β -ME 处理。 2．研钵预冻，粉末至加 CTAB 前不要融化。 3．24:1 的氯仿 / 异戊醇抽提时动作应轻柔，转移用的枪头最好是剪宽了的。 4．所用试剂必需灭菌，手套。 DNA大样的提取方法(CTAB法) 取8g水稻新鲜叶片，切成05cm的碎片，用液氮研磨成粉末状，将叶片粉末移入一50ml离心管中，-20℃保存时间不超过24h。 提取前，将1.5ⅹ的CTAB溶液预热至100℃。 每管中加