一种新的家蚕生殖障碍突变的鉴定与基因定位.pdfVIP

学 号： 092300007 文 摘： 家蚕（Bombyx mori ）作为重要经济昆虫和鳞翅目昆虫模式，其突变体是生 理学、遗传学、功能基因组学等研究宝贵资源，现已保存有600 余种稳定的天然 [1] 突变体 ，已有300 多个突变性状被定位到了230 多个位点上。家蚕基因组精细 图的完成以及 SSR、SNP 分子标记定位技术的日趋成熟，为重要突变性状的图 位克隆奠定了基础，家蚕性别决定与生殖、发育变态、抗性、经济性状相关的功 能基因的精细定位与克隆鉴定研究已成为近期的研究热点，并取得了瞩目的进 展。 但在家蚕性别发生与生殖发育领域研究取得的进展缓慢，最重要的原因是家 蚕有关性别发生与生殖发育方面的遗传材料缺乏。 家蚕性别决定与生殖与果蝇、线虫等模式生物的差异较大，家蚕生殖相关的 突变也鲜见报道，因此家蚕性别决定与生殖的分子机制研究进展缓慢。本课题以 本团队首次发现的一种两性均表现生殖障碍的自然突变品系为材料，综合应用解 剖学、组织化学、遗传学、分子生物学等研究方法，分析其性状遗传规律，生殖 系统的结构和组织变化特性，对突变基因进行了分子标记连锁和精细定位分析。 研究内容及主要结果如下： 一、家蚕生殖障碍突变的发现与遗传分析 2007 年春蚕期在保育的实用品种皓月（鲁系）出现高比例的不产卵雌蛾， 初步解剖发现所有不产卵雌蛾体内均无成熟的蚕卵。采集同蛾区的3 头雄蛾与皓 月（镇系）品系进行杂交至F2 群体中出现不产卵雌蛾的分离。经10 代以上同蛾 区交配建立了家蚕生殖障碍突变系。 经过同一对亲本所产生的45 蛾区的F2 群体的遗传分析表明，突变性状受 1 个隐性基因控制，纯合隐性个体表现为雌蛾无卵、雄蛾不能使交配雌蛾产出受精 卵。该突变基因可以通过携带隐性突变基因的杂合子个体进行遗传传递。 二、家蚕生殖障碍突变的解剖学与组织化学分析 野生型品种家蚕卵巢管随着幼虫期发育而变长，同时伴随着卵子及卵室的发 生和发育，在突变品系的部分个体发现卵巢管内没有卵子发生以及卵室形成，其 卵巢管的伸长受到明显抑制。对野生型品系母蛾产卵后的卵管和突变型雌蛾的卵 巢制作切片进行观察，野生型与突变型品系的卵巢的细胞及组织结构并未发现明 显差异，因此可初步推断无生殖细胞突变型个体的雌蚕卵子发生、迁移或分化阶 段的异常可能是主要原因。 雄蚕精巢及雄蛾雌雄内部生系统未见明显的形态差异。切片观察表明在野生 型品种的化蛹2d －3d 的精巢中每个精巢小室内充满发育中的精子束，而在突变 系的精巢中，精巢小室内呈空腔状，没有发现精子束的存在。野生型品系雄蛾的 贮精囊内存在大量精子束，而突变体贮精囊内未能发现精子束的存在。可以认为 突变型雄蛾个体不能使交配雌蛾正常产受精卵的原因是因为不能产生精子所致。 因此，将本实验研究的家蚕生殖障碍突变命名为家蚕无生殖细胞突变 （mutation of non-germ-cell, ngc ）。 三、生殖障碍突变基因ngc 的连锁与定位分析 由生殖障碍突变品系皓月作为母本，野生型品种大造 （p50 ）作为父本组配 F 和F ，收集表现突变表型的雌蛾和雄蛾F 个体285 头作为连锁分析和定位分 1 2 2 析群体，利用 377 测序仪和高分辨率熔解分析（HRM ）技术进行连锁分析和精 细定位。连锁分析的结果表明，无生殖细胞突变性状是由单个隐性基因控制，决 定该突变性状的ngc 基因位于第17 连锁群上。 绘制出了家蚕 ngc 基因的分子标记连锁图，连锁图的遗传距离为 29.7cM， Z17149 和Z17S 标记与ngc 距离最近，均为0.4cM 。，Z17149 标记和Z17S 标记 分 别 对 应 于 家 蚕 基 因 组 nscaf2865:4957849_4958073(+ strand) 和 nscaf2865:5096445_5096643(+ strand)，两者间的物理距离为138kb。 四、定位区域的候选基因预测 精细定位确定的 138kb 区域内有 2 个预测基因 BGIBMGA007134-TA 和 BGIBMGA007135-TA，编码的蛋白分别与与果蝇（Drosophila melanog