不同产地卷柏药材中总黄酮的含量测定论文.docVIP

　　不同产地卷柏药材中总黄酮的含量测定论文 冯志毅 赵献敏 王彦志 魏悦 郭永慧 张冰 郑晓珂 【摘要】 目的研究不同产地卷柏中总黄酮的含量测定方法。方法以阿曼托双黄酮为对照品，绘制标准曲线，将卷柏95％乙醇回流提取液，在337 nm波长下测定吸收度。结果总黄酮含量为1.52%，平均回收率为99.90 %，RSD=1.35%(n=6)，线性范围1.92～11.52 μg·ml-1，r=0.999 8。结论该法测定卷柏总黄酮含量.freelariscina (Beauv.) Sping.或垫状卷柏Selaginella pulvinata(Hook. et Grev.) Maxim.的干燥全草，具有活血通经功效。主要用于经闭痛经、跌打损伤等［1］病症。现代药理学研究证实，卷柏所含的阿曼托双黄酮、新柳杉双黄酮［2～4］等黄酮类化合物，具有抗脂质过氧化和清除自由基的作用，对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用［5］。本研究采用紫外分光光度法测定了全国10批不同产地卷柏中总黄酮的含量。 1 仪器与试药 1.1 仪器岛津UV-2201紫外分光光度计；AB204-N万分之一电子天平；AE240十万分之一电子天平；DZKariscina (Beauv.) Sping.的全草。阿曼托双黄酮为本实验室自制，纯度达到99%以上，水为超纯水，乙醇等试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 供试品溶液及对照品溶液的制备 2.1.1 供试品溶液精密称取卷柏药材（过3号筛）粉末约4.00 g，置100 ml圆底烧瓶中，加95％乙醇40 ml，85 ℃回流2 次，2 h/次，提取液浓缩，真空干燥。精密称取干燥恒重的提取物约3.00 mg，置100 ml容量瓶中加95%乙醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。 2.1.2 对照品溶液精密称取干燥恒重的阿曼托双黄酮2.00 mg，置25 ml容量瓶中，加95%乙醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液。 2.2 测定波长的选择取对照品溶液及供试品溶液，在190～800 nm波长范围内测定吸收光谱。结果见图1～2。 图1 对照品阿曼托双黄酮溶液吸收光谱图（略） 图2 供试品溶液吸收光谱图（略） 对照品阿曼托双黄酮溶液和供试品溶液在270 nm和337 nm处均有较大吸收。由于270 nm靠近溶剂末端吸收，容易对样品测定造成干扰，故选337 nm为测定波长。 2.3 线性关系的考察精密取配置好的对照品溶液0，1，2，3，4，5，6 ml置25 ml容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，摇匀，在337 nm处测定其吸收度(Y)值，并以吸收度(Y)对浓度(X)进行线性回归，得回归方程Y = 52.147 X + 0.028，r=0.999 9 (n=7)。结果表明，对照品在1.92～11.52 μg·ml-1范围内线性关系良好。 2.4 精密度实验精密吸取对照品溶液6份，每份0.5 ml，分别置25 ml容量瓶中，95%乙醇定容至刻度，于337 nm处测定吸收度，由标准曲线按外标法计算供试品溶液中总黄酮含量，求得RSD为0.88％，显示精密度良好。 2.5 重复性实验精密称取同一样品（产地：河南）适量，按“2.1”项下方法制备供试品溶液6份，于337 nm处测定吸收度。由标准曲线按外标法计算供试品溶液中总黄酮含量，求得RSD为0.70％，表明本测定方法的重复性良好。 2.6 稳定性实验取同一样品(产地：河南) 适量，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，室温下放置0，2，4，6，8，12，24，48 h测定吸收度，计算总黄酮含量，结果RSD为0.21％，说明供试品溶液在48 h内稳定。 2.7 回收率实验 照“2.1”方法制备供试品(产地：河南)乙醇提取物，精密称取已知含量的卷柏乙醇提取物6份,.freelg，分别精密加入对照品溶液适量，按“2.1”项下供试品溶液的制备方法配制回收率供试品溶液，于337 nm处测定吸收度，由标准曲线按外标法计算总黄酮含量，计算回收率。结果见表1。 表1 回收率考察（略） 2.8 样品测定分别精密称取10批不同产地卷柏药材粉末各4.0 g，按“2.1”方法制备供试品溶液，于337 nm处测定吸收度，由标准曲线按外标法计算总黄酮平均含量达1.52%。结果见表2。 表2 不同产地样品中总黄酮含量测定结果（略） 3 讨论 在制备样品溶液时，比较水煮、超声、回流等不同提取方法，发现回流提取得到的阿曼托双黄酮的含量较高，故采用回流提取的方法对样品进行处理。 在实验过程中参照满山红中总黄酮含量测定方法［1］，以AlCl3为显色剂，利用可见分光光度法测定卷柏总黄酮的含量，结果表明所选波长及其显色方法很不稳定，误差较大；进而参照半