T细胞免疫功能检测平台的建立与在感染性疾病中的应用.docVIP

T细胞免疫功能检测平台的建立和在感染性疾病中的应用 李太生 中国医学科学院 中国协和医科大学 北京协和医院感染内科 北京 100730 通作者：李太生，Email：litsh@263.net Enzyme-Linked immunosorbent assay，ELISA）、酶联免疫斑点试验（Enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT）、流式细胞术（Flow cytometry，FCM），其中FCM鉴于其独特的优势在感染性疾病中应用广泛。 国际上很早就开展了用FCM检测T和B细胞各亚群来评估免疫功能并指导临床医生进行感染性疾病的诊治。如笔者早年在法国巴黎学习的Pitié-Salpétrière医院于1993年就在临床上常规开展FCM检测淋巴细胞亚群以及淋巴细胞增殖功能的检测，帮助对感染性疾病诊疗的指导。而国内到目前为止临床上也仅在少数医院开展了最基本的辅助T细胞和抑制T细胞的检测，与国际上存在很大的差距。 我们协和医院感染科在1999年率先在国内建立了用FCM检测T、B淋巴细胞亚群的平台，并于2001年开始应用于临床，先后对人类免疫缺陷病毒感染/获得性免疫缺陷综合症（Human immunodeficiency viruses infection/Acquired immunodeficiency syndrome，HIV 感染/ 艾滋病（AIDS））、病毒性肝炎、严重急性呼吸综合征（Severe acute respiratory syndrome，SARS）等常见或新发传染病进行了一系列的研究，现介绍如下： FCM简介 FCM是20世纪70年代发展起来的一种测量悬浮在液体中的细胞、细胞器、染色体或其他微粒的各种物理、化学、生物学、免疫学或遗传学等特性的动态分析技术，以每秒数百、数千个细胞的速率进行多参数定性或定量分析[1]。应用FCM可测量细胞大小、DNA/RNA含量、细胞表面抗原表达等多种参数，是细胞分析和分选的有力工具，其功能包括：细胞表型分析、DNA含量及细胞周期分析、细胞内及核膜成分分析、细胞分选、自身抗体检测等[2]。在临床医学中可广泛应用于肿瘤学、血液病、感染性疾病、免疫缺陷病、自身免疫病等多种疾病的诊治。近年来FCM发展迅速，多色流式细胞术（polychromatic flow cytometry, PFC）由5色（20世纪90年代），发展到13色（2001年），甚至18色（2006年）的先进PFC[3]。目前临床上应用最广的是对T淋巴细胞及其亚群测定，较新的还有测定T淋巴细胞特异性胞内细胞因子、结合荧光染料标记测定淋巴细胞增殖能力等。 T淋巴细胞各亚群简介及意义 FCM根据淋巴细胞表面标志的不同可检测各亚群细胞的数量和比例，包括T淋巴细胞（CD3+），B淋巴细胞（CD19+），NK细胞（CD16+CD56+），其中T淋巴细胞可进一步测定辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）、抑制/细胞毒T淋巴细胞（CD3+CD8+）、CD4+T细胞纯真亚群（CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RA+62L+）和记忆亚群（CD4+CD45RA-/ CD4+CD45RO+）、功能亚群（CD28+）、激活亚群（CD38+、HLA-DR+）、凋亡亚群（CD95+）等[2]。 T淋巴细胞主要反映机体的细胞免疫功能状态，不同的亚群有不同的临床意义。CD4+T纯真亚群经特异性抗原刺激后，可转变为记忆亚群，当再次暴露于相同的抗原时能迅速参与对特异性抗原的有效免疫应答，根据纯真/记忆的比例可进一步揭示疾病对CD4+T细胞的影响。CD28是T细胞正常激活所必须的协同刺激分子受体，缺乏CD28的CD4+T细胞不能完成正常的免疫功能，因此CD28的表达比例可用于衡量CD4+T细胞的功能。CD38、HLA-DR是T细胞激活的分子标志物，激活亚群可用于评价细胞的免疫激活状态。CD95（Fas受体）是介导细胞凋亡的主要受体之一，凋亡亚群可评价细胞的凋亡情况。 三、 我科关于T淋巴细胞亚群检测平台的建立和在感染性疾病中的应用 T淋巴细胞亚群受生态环境、社会经济等多种因素影响，不同地区、不同种族之间存在差异[4]。我科2002年在国内较早的建立了我国青壮年健康人T细胞各亚群的参考范围[5]，并随后研究了不同年龄的T亚群的差异，发现大部分T细胞及各亚群（包括CD3、CD4、纯真CD4、CD4+CD28+）和年龄呈负相关，而NK、记忆CD4和年龄呈正相关，并确立了中国健康人不同年龄段的T亚群的参考范围[6]。 （一） T细胞亚群检测在HIV/AIDS诊治中的临床意义 随着HIV/AIDS患者人数的逐年上升，我国面临着艾滋病疫情的严峻挑战。我科经过二十多年对HIV/AIDS患者的T亚群改变的研究，主要有以下发现： 1