均匀设计优化澳洲坚果SRAP反应体系.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2008，25(2)：250-253 JournalofFruitScience 均匀设计优化澳洲坚果SRAP反应体系 郭凌飞 1,2邹明宏 ，杜丽清 ，曾 辉 ，陆超忠 (t中同热带农业科学院南亚热带作物研究所 广东湛江 524091；：华南热带农业大学同艺学院，海南儋州 571737) 摘 要 ：以澳洲坚果部分种质为试材 ，采用 U25(5)均匀设计表 ，对 SRAP—PCR反应体系中raqDNA聚合酶 、模板 DNA、dNTPs、Mg 、引物 5个组分的浓度进行优化。结果表 明澳洲坚果 25 L的 SRAP反应体系的最佳组分包括 2．5 txL10xPCRbuffer、lUraqDNA聚合酶、40ng模板DNA、0．2mmol／LdNTPs、0．2txmol／L引物和3．0mmol／LMg2_。利用 所确立的体系对部分澳洲坚果种质进行扩增的结果清晰可靠 ，多态性好 。 关键词 ：澳洲坚果 ；SRAP；体系优化；均匀设计 中图分类号：$664．9 文献标识码：A 文章编号：1009—9980(2008)02—250—04 Optimizationofthesequence-relatedamplifiedpolymorphism (SRAP) reactionsystem formacadamiabyuniform design GUOLing一 ilI2，ZOUMing-hong，DULi-qing，ZENGHui，LUChao-zhong (SouthSubtropicalCropsResearchInstitute，CATAS，Zh iang，Cao~gdong524091China；CollegeofHorticulture，SouthChinaTropi— cdAgricuhuralUniversit?．Danzhou．Hainan57l737China) Abstract：Theuniofrmdesignwasusedtooptimizethesequence—relatedamplifiedpolymorphism fSRAP1reactionsystemfor macadamia，whichinvolved5factors，i,e．raqDNApolymerase，templateDNA ，dNTPs，primerandM ，eachat5levels． Theresultshowedthatanoptimal25IxLreactionsystem ofSRAPofrmacadamiaincluded2．5txL10xPCRbuffer，1U roe DNApolymerase，40ngtemplateDNA，0．2mmol／LdNTPs，0．2txmol／Lprimerand3．0mmol／LMg“．Applicationofthis optimumreactionsystem tofingerprintsomemacadamiaaccessionsproducedclearpolymoprhicpatterns． Keywords：Macadamia；SRAP；Systemoptimization；Uniofrmdesign 澳洲坚果又称夏威夷果 、澳洲核桃 、昆士兰坚 果11、柑橘类果树I1、樱桃ll1、大蒜11、棉花 、柿子 【1等植 果 ，原产于澳大利亚 ，属 山龙眼科 (Proteaceae)澳洲 物和水稻稻瘟病4[1的研究。该技术在国外应用较多， 坚果属 (MacadamiaF．Muel1)常绿乔木。坚果种仁营 国内对此技术的应用尚处于起步阶段 ．在澳洲坚果 养价值高。风味独特。我国自1979年起开始澳洲坚 方面尚未见有相关报导。作者 旨在通过优化澳洲坚 果的栽培 ，经过近20a的发展 ，至 2005年 ，全国栽 果 SRAP反应体系 ，为今后从分子生物学方面进行 培面积已达 3516．53hm ，主要集中于云南和广西