砂梨扩展蛋白基因cDNA克隆及全序列分析.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2008，25(2)：166～171 JournalofFruitScience 砂梨扩展蛋白基因cDNA克隆及全序列分析 宋长年 ，乔玉山 ，章 镇 ，胡钟东 ，渠慎春 ，熊爱生 ，姚泉洪 f’南京农业大学园艺学院果讨生物技术研究室，南京 210095；上海市农业科学院牛物技术研究所 ，上海 201106) 摘 要 ：设计植物 EXP扩展蛋 白简并引物 ，以砂梨果实 cDNA为模板 ，克隆得到 EXP基 cDNA片段 ，该片段长 465bp。根据该片段序列 ，分别设计2条 5’和3’末端扩增的特异 引物 ，利用 RACE技术 ，获得了该片段的5’端和3’ 端序列。用 DNAMAN5+22软件对 3个序列进行拼接和分析 ，获得 了该基 的cDNA全长，命名为n 一EXP。该 cDNA 全长为 l395bp，5’端起始密码子ATG始于72bp．3’端终止子T-AG止于830bp，Ploy+(A)从 l363～l395bp。该基因 已在GenBank基因数据库注册 ，注册号为 EF602031。Pyp-EXP核苷酸序列有一。个 759bp完整的开放 阅读框 。编码 区 与西洋梨、苹果、湖北海棠、桃的同源性分别为 96％，96％，94％和 86％；该 cDNA推导编码252个氨基酸 ，含有 1个组 氨酸(His_Phe—Asp，HFD)功能域，与两洋梨、苹果、湖北海棠、桃中相应序列同源性分别为98％，97％，95％和93％。该 基因的克隆为研究扩展蛋白的时 表达及其在果实发育和成熟过程 中的作用奠定 了基础 关键词 ：砂梨 ；扩展蛋 白；分子克隆；序列分析 中图分类号：$665．1 文献标识码：A 文章编号：1009—9980(2008)02—166—06 CloningandsequencingofexpansiongenefromCyruspyrifolia SONGChang—nian，QIAOYu—shan ，ZHANGZhen，HUZhong-dong，QUShen-chun，XIONGAi- sheng．YAOQuan—hong (LdooratoryojBiotechnolo~forFmnTrees，College0}Horticulture，NanjingAgrieulturalUniversityNanjing210095China；2Biotechnol- ogyResearchInstitute．Sh~(ghai4ctutemyofAgriculturalScience．Shanghai201106China) Abstract：Degenerateoligonucleotideprimersweredesignedonthebasisofconserveddomainofotherexpansions，anda partialrfagmentof465bp，wasclonedfromeDNAlibraryofripeningrfuitof spyrifoliaNakai。AccordingtothecDNA fragmentsequence，the5’endand3’endfragmentsequenceswereobtainedRACEtechnologyrespectively。Thefulllength ofcDNAofexpansiongene，designatedasP)p—EXP．was1395bpbyDNAMAN5。22rfom abovethreesequences。The5’ endincludedaputativetranslationstartcodon (AFG)atposition72bp，the3’endincludedanendcodon (TAG)atposition 830bpandaPloy(A)tailatpositionfrom1363bpto1395bp (theaccessionnumberinGenBankdatabaseisEF602031)． rhePYP—EXPgenehadallopenreadingframe fORF)