中国樱桃S-RNase基因PCR扩增技术体系的建立.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2008，25(2)：277～280 JournalofFruitScience 中国樱桃 S-RNase基因PCR扩增 技术体系的建立 李 晓，吴 俊，张绍铃 (南京农业大学园艺学院，南京 210095) 摘 要：通过对 TaqDNA聚合酶、Mg2、dNTP、通用引物 、模板DNA浓度等反应参数的系统研究，建立了中国樱桃 S— RNase基 特异PCR扩增体系。该体系反应的总体积25 L，其 中 酶 1．25U，MgC12．5mmolL／，dNTP0．15mmolL／，通 用引物 0．25~mol／L，模板 DNA50ng。反应程序为：94℃预变性 3min；33个循环的94℃变性 1min．56℃退火 45s． 72℃延伸 1．5min；最后 72℃延伸 10min。利用优化 的扩增体系在 中国樱桃 的不 同品种中获得有效扩增 ，进一步证明 了该体系具有 良好 的稳定性和重复性 。 关键词 ：中国樱桃 ；S—RNme基 因：PCR扩增体系 中图分类号：$662。5 文献标识码：A 文章编号：1009—9980(2008)02—277—04 EstablishmentofPCR reactionsystem ofS-RNasegeneinChinesecherry cultivars(Cerasuspseudocerasus) LIXiao，WUJun，ZHANGShao—ling {C0{kgeofHorticulture，NanjingAgrieulturalUniversity，Nanjing，Jiangsu210095Chi Abstract：AspecialPCR reactionsystem hasbeenestablishedforS-RN~egeneinChinesecherrythroughtheoptimization oftheconcentrationofTaqDNApolymerase，Mg“，dNTP，universalprimersandtemplateDNA．Thereactionvolumewas25 L，containing1．25U TaqDNApolymerase，2．5mmol／LMgC12，0．15mmol／LdNTP，0．25~mol／Luniversalprimersand50 ngDNA．ThePCR cyclewasdesignedasfollowing，pre-denaturingat94℃ ofr3min，denaturingat94oCofr1min，an— nealingat56oCofr45S，extensionat72oCofr1．5min，total33cycles，thenextensionat72oCofr10min．Thestabilityand repeatabilityofthesystem hadbeenvalidatedbytheeffectiveamplificationofS——RNasegenesinChinesecherrycuhivars． Keywords：Chinesecherry；S—RNasegene；PCRamplificationsystem 中国樱桃 ，又名小樱桃 Prunuspseudocerasus 况下 ，往往造成扩增 的失败 ，因此有必要探索 PCR Lind1．1发源于我国长江流域 ，距今 已超过 3000a的 反应各影响参数的浓度 ，以便建立一个优化反应体 历史…。中国樱桃资源多数处于野生状态，表现 自交 系，为获得有效的试验结果提供保障。我们选用能够 亲和性 ．这与樱亚属植物如甜樱桃等表现的配子体 扩增 S—RNase的通用引物 Pl1l—CJPru—C，通过对各 自交不亲和性孑然相反 。目前 ，国际上重点开展 了甜