生化实验考核.docVIP

唾液淀粉酶最适PH值测定 实验设计方案 班级：2012级临床5班 组别：3组 组员：201250261 蓝岚 201250259 郑姗姗 201250483 林广潮 201250439 程雪 实验目的： 了解唾液淀粉酶的最适ph，把酶学知识应用于临床诊断与应用治疗。掌握精测唾液淀粉酶最适pH值的方法，熟悉缓冲溶液的配置，722分光光度计的使用。 实验原理： ph的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受ph影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。利用朗伯—比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在660nm处地吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适PH值。正常参考值为6.8左右。 实验仪器与试剂： 试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37℃恒温水箱、分光光度计、吸量管（1ml 5ml） 试剂药品： 2.5%淀粉溶液、碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 试剂 PH 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 磷酸氢二钠 0.615 0.925 1.325 1.875 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.575 4.735 磷酸二氢钠 4.385 4.075 3.675 3.125 2.55 1.95 1.4 0.95 0.65 0.425 0.265 定容到10ml （2）唾液的获取： 蒸馏水漱口,然后用舌尖抵住上额或下额齿根后,微低头.轻启双唇，将下嘴唇搁在烧杯边缘，让唾液自然流入试管中. （3）唾液的稀释：取10支试管，分别编上号00～09 ??试剂 管?号 00?????01???? 02 ????03???? 04?????05????? 06???? 07???? 08?? ? 09 唾液(ml)??????? 0.5?? 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 蒸馏水(ml)???? ????2.0 ?3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 8 .0 9.0 10.0? （4)唾液稀释倍数的选取： 另取10支试管，分别编上00～09号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，然后向10支试管内同时加入0.1ml的2.5％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37??? 恒温水浴箱中，7.5分钟后取出，滴加2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。 结果选取03号管的唾液浓度 （5)测量pH： 取11支试管，分别标上号1～11，按下表操作 ??? ?????????????????????????????? 用量（10ml） ???????????试剂?管号???? ? 1?? ?2??? ?3??? 4??? 5??? 6?? 7???? 8???? 9????10??? 11?? 12 — 0.0 2.5％淀粉溶液(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 ???? ?2ml缓冲溶液pH? 6.8 6.0?? 6.2? 6.4??? 6.6?? 6.8?? 7.0?? 7.2?? 7.4?? 7.6?? 7.8?? 8.0?????????? ???????????? (保温10min)??? 37??℃???????????????????????????? 稀释唾液(ml)?????? 1????? 1???? 1??????1?????1???? 1???? 1???? 1?????1????1??? 1????? 1 混匀后继续保温 A 充分混匀后继续水浴加热，从1号试管中每隔1min取一滴液体，滴入试管中，再滴一滴碘液与之反应，观察颜色变化，当