A.TB2阳性判断值研究资料20141029提交中检院版本.docxVIP

申请分类：首次注册申请注册分类：第三类体外诊断试剂产品通用名称：结核分枝杆菌特异性T细胞检测试剂盒（酶联免疫法）资料项目名称：阳性判断值确定资料研究机构名称：海口维瑅瑷生物研究院研究机构地址：海南省海口市秀英区长怡路20号原始资料保存地点：海口维瑅瑷生物研究院联系人：丰玫玫联系方式：电话：08988127真：0898-子邮件：fmeimei2013@163.com产品注册申请人：海口维瑅瑷生物研究院（盖章）目录1确定阳性判断值的样本来源12阳性判断值的确定方法23阳性判断值的确定23.1阳性判断值的初步确定23.1.1样本OD值分布分析临床前样本N值柱状分布统计当N＜0.5时，总样本、阳性样本与阴性样本散点分布图当0.5≤N＜2.5时，总样本、阳性样本与阴性样本散点分布图当N≥2.5时，总样本、阳性样本与阴性样本散点分布图73.1.2 ROC曲线分析73.1.3 结果分析93.2 参考值的验证93.2.1临床样本N值柱状分布统计103.2.2当N＜0.5时，总样本、阳性样本与阴性样本散点分布图113.2.3当0.5≤N＜2.5时，总样本、阳性样本与阴性样本散点分布图123.2.4当N≥2.5时，总样本、阳性样本与阴性样本散点分布图133.2.5 ROC分析143.2.6 拟注册产品的敏感性和特异性154附件16附件1临床前阳性判断值研究数据16附件2临床阳性判断值研究数据16附件3临床前样本信息16附件4临床样本信息161确定阳性判断值的样本来源拟注册产品是基于γ干扰素（IFN-）释放分析技术（IGRA技术）的结核分枝杆菌感染（包括结核病）免疫诊断试剂。IGRA技术的基本原理是，机体感染结核分枝杆菌后，血液中的记忆性淋巴细胞会在再次接触结核分枝杆菌特异性抗原时产生和分泌IFN-，通过体外定量检测全血细胞被结核分枝杆菌特异性抗原刺激后释放的IFN-水平，定性判断其是否具有针对结核分枝杆菌的特异性T细胞反应，可用于结核分枝杆菌感染的诊断和结核病的辅助诊断。由于结核分枝杆菌感染的诊断没有金标准，确定阳性判断值时，我们使用了两种类型的阳性样本，一种为结核菌素试验（TST）阳性（10mm）且IGRA检测阳性（已上市产品检测）的健康人样本，用于临床前研究中初步阳性判断值的确定；另一种为培养阳性的活动性结核患者样本，即细菌学确诊的结核杆菌感染者，因为国际上IGRA类诊断方法在临床研究中评价敏感性时普遍采用结核分枝杆菌培养阳性作为结核感染的替代金标准。但由于活动性结核是机体未能成功控制感染而发生的，而且痰菌阳性表明患者正处于活跃的排菌状态，疾病的进程、治疗方案或患有结核病相关疾病可能会影响到特异性细胞免疫应答，因而在选择确定阳性样本时，要求符合以下标准：（1）近期（30天）结核分枝杆菌培养阳性；（2）抗结核治疗少于30天；（3）HIV抗体检测呈阴性；（4）非皮质类固醇药物和免疫抑制类药物使用者。根据IGRA类产品的技术原理，理想的阴性样本应该来自没有被结核分枝杆菌感染的人群。然而，由于结核分枝杆菌感染的诊断没有金标准，国际上IGRA类诊断方法选择阴性样本时普遍采用结核分枝杆菌低暴露风险的健康人。我国是结核病高负担国家，人群结核杆菌暴露风险较大，感染率较高。同时，由于我国普遍实施卡介苗接种，考虑到结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）与卡介苗和非结核分支杆菌存在交叉反应，TST试验阳性者可能是卡介苗接种者或结核分枝杆菌感染者，也可能是接种过卡介苗的结核杆菌感染者或非结核分枝杆菌感染者，因而难以通过单纯的TST试验获得阴性参考品。由于相关文献建议将TST试验≥10mm作为卡介苗接种的阳性标准，临床前研究中，我们使用TST试验阴性且IGRA检测阴性（已上市产品检测）的健康人样本作为阴性样本，临床研究中通过问卷调查选择结核分枝杆菌低暴露风险、TST试验10mm且胸部X光检查无异常的健康人用于阴性样本的来源。上述阳性样本和阴性样本均由北京胸科医院提供。2阳性判断值的确定方法阳性判断值的确定分为两步，在临床前研究阶段，通过一定数量的阳性样本和阴性样本的检测结果确定出一个初步的判断值；在临床研究阶段，根据大样本量的阳性样本和阴性样本的检测值进行ROC曲线分析，对临床前确定的初步阳性判断值进行调整，获得最优的敏感性和特异性，然后在临床诊断的病例组和对照组中对此阳性判断值进行验证。3阳性判断值的确定3.1阳性判断值的初步确定根据IGRA类产品的技术原理，拟注册产品的检测由三个反应组成，即阴性对照反应（N值）、特异性抗原刺激反应（T值）和阳性对照反应（P值）。N值表示待检样本（新鲜全血）在未经任何抗原刺激时，表现出的-干扰素水平；T值代表样本中的淋巴细胞针对结核杆菌特异性抗原刺激后特异性释放的-干扰素水平