海岛棉DREB基因的克隆及植物表达载体的构建.pdfVIP

新 疆 农 业 大 学 学 报 2010，33(4)：3l2～316 JournalofXinjiangAgriculturalUniversity 文章编号 ：1007—8614(2010)04—0312—05 海岛棉 DREB基因的克隆及植物表达载体的构建 张艳妮 ，陈全家，张 桦 ，郑 鹏，周丽容，曲延英 (新疆农业大学 农业生物技术重点实验室 ，乌鲁木齐 830052) 摘 要 ： 根据 GenBank上公布 的棉花 GhDREB1基 因序列设计特异性引物 ，从海 岛棉 中克隆了一个与 DREB类 基 因同源的cDNA序列，命名为 XHDREB。序列分析表明，该 cDNA序列长度为 651bp，推测含有 216个氨基酸 ， 分子量为24．6kDa，等 电点为 9．46。同源性分析表 明，它与GhDREB1的氨基酸序列同源性为85．19 。所编码蛋 白具备 DREB1转录因子的特征 ：含有 58个氨基酸组成 的AP2DNA结合域 以及两个 DREB1／CBF特征氨基酸序 列 PKKRAGRKKFRETR和DSAWR。然后将 XHDREB基因连接到pCAMBIA2300—35SOCS质粒上 ，构建 了植物 表达载体 。 关键词 ： 抗逆 ；DREB基 因；基因克 隆；植物表达载体 中图分类号 ：$336 文献标识码 ：A CloningofDREB Genefrom IslandCotton (Gossypium barbadenseL．)andConstructionofaPlantExpressionVector ZHANGYan—ni，CHEN Quan-jia，ZHANGHua， ZHENG Peng，ZHOU Li—rong，QU Yan—ying (KeyLab．ofAgriculturalBiologicalTechnology，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi 830052，China) Abstract： Inthisstudy，accordingtogenesequenceofcottonGhDREB1transcription factorpublishedon GenBank，thespecificprimersweredesigned．TheeDNA sequenceofDREBgenehomologyclonedfrom is— landcottonwerenamedXHDREB．Sequenceanalysisshowed thatcDNA ofXHDREB was651bp long． Thepredictedproteinhas261aminoacidswithanestimatedmolecularmassof24．6kDaandanisoelectric pointof9．46．Homologicalanalysisshowedthatover85．19 aminoacidsinthesequencesweresimilarto GhDREB1．TherewereDREB1transcriptionfactorincodedprotein．58aminoacidsconstituteaDNA bind— ing region AP2 and tWO typical characteristics amino acids sequence to DREB1／CBF： PKKRAGRKKFRETR andDSAW R．TheXHDREBgenewasclonedintothepCAMBIA2300—35S0CSvec- tortOobtainplantexpressionvector．Thisisthepreparationforgenetictransformation． Keywords： stresstolerance；DREB gene；geneclone；plantexpressionvector 在 自然界，植物生长在开放的系统中，一些不 良 根本的改良，其重点还是要从一些关键的调节因子 环境因子会直接影响植物生长及作物产量，甚至会 着手。DREB是存在于植物中的一类抗逆性转录因