实验性肝癌中比较槐医耳与IL-2对PTEN和IL-2R阳性细胞的影响 ;.pptVIP

实验性肝癌中比较槐耳与IL-2对PTEN和IL-2R阳性细胞的影响 研究生 陆鹏 指导教师 陈莉教授;前言 ; PTEN (与细胞骨架蛋白tensin同源在肿瘤的10号染色体有缺失的磷酸酯酶)是定位于10q23的一种具有磷酸酯酶活性的抑癌基因，PTEN蛋白能够抑制肿瘤的浸润和转移，诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期。; 本课题拟通过诱癌剂诱导大鼠肝癌，并通过应用槐耳清膏和IL-2干预癌形成过程，诱癌20周后观察肝组织的病理变化、IL-2R阳性细胞的表达情况以及PTEN表达水平，从而探讨与比较槐耳与IL-2对于肝癌形成与发展的影响，及其可能的作用机制。;材料与方法;动物实验试剂 二乙基亚硝胺（DENA，Sigma公司）、金克-槐耳清膏（江苏启东盖天力药业有限公司）、注射用重组人IL-2（江苏金丝利药业有限公司）。 ; 免疫组化试剂 IL-2R/ CD25α链单克隆抗体（NeoMarkers公司）、 即用型免疫组化二步法染色试剂盒 （福州迈新 KIT-9801）。; RT-PCR试剂 RT试剂盒（上海生工生物技术服务有限公司） PCR试剂盒（上海生工生物技术服务有限公司） 100bp DNA ladder（华美生物工程公司） PTEN引物（上海生工生物技术服务有限公司） 内参GAPDH引物（上海生工生物技术服务有限 公司） ; 1) 动物实验 2) 常规切片制作 3) HE染色及镜下观察 4) 免疫组织化学染色检测IL-2R阳性细胞 5) RT-PCR检测PTEN表达 6) 统计分析;40只正常雄性SD大鼠，体重100—120g。大鼠置普通级动物实验室饲养，标准饲料喂养及自由饮水，气温20～25℃，湿度为50-60%，2-3只/笼;实验分组;DENA灌胃，70mg/kg，每周一次，连续用药15周后停药;免疫组化二步法 抗原修复：柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）煮沸20min IL-2R α链单克隆抗体（工作浓度：1︰400）37℃孵育30min，4℃过夜 捷达形态分析系统计数IL-2R阳性细胞数;PCR执行程序：;PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳 ;Stata 6.0统计软件 多组等级资料 秩和检验（Kruskal-Wallis法） 率的比较 卡方检验 两样本均数的比较 t检验 多个样本均数的比较 单因素方差分析 两变量依存关系 直线相关分析 检验水准α＝0.05;结果 ;1) 各组大鼠肝脏病理观察 2) 各组鼠肝组织正常、不典型增生与癌形成 的比较 3) 各组癌形成率的比较;正常对照组，HE染色×250 ;单纯诱癌组，癌形成伴有明显坏死 HE染色×250 ;诱癌加槐耳清膏组，不典型增生结节 HE染色×250 ;诱癌加九周后槐耳清膏组 卵圆细胞增生 HE染色×250 ;诱癌加九周后IL-2组 以透明细胞为主的增生伴癌结节形成 HE染色×250 ;各组中组织切片正常、不典型增生与癌形成的比较 ;百分率（％）;;1) IL-2R阳性细胞的特征与分布 2) 各组大鼠肝脏中IL-2R阳性细胞数的比较 3) 诱癌各组无癌形成病例与癌形成病例中IL-2R阳性细胞数的比较;单纯诱癌组 肝癌中IL-2R阳性表达于淋巴细胞膜及胞浆 免疫组化二步法×500;诱癌加槐耳清膏组 肝组织中IL-2R阳性表达于淋巴细胞膜及胞浆 免疫组化二步法×500;F＝17.57，（p＝0.00）; G 1 2 3 4 -----|--------------------------------------------------------------------- 2| 0.975 | 1.000 | 3| 20.308 19.333 | 0.020 0.048 | 4| 19.761 18.786 -0.548 | 0.018 0.045 1.000 | 5| 38.646 37.671 18.338 18.886 | 0.000 0.000 0