氨基酸和多肽—培训课件.pptVIP

5．肌肽和鹅肌肽(二肽) 肌肽(carnosine): β-Ala-His 鹅肌肽(anserine)：β-Ala-1-Me-His 39肽，活性部位为第4~10位的7肽片段： Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly 6．促肾上腺皮质激素(ACTH) 天然存在的某些活性肽(active peptide) 近年来，多肽的分离纯化、结构分析、化学合成、生物、放射免疫测定、免疫细胞化学以及遗传工程等新技术的应用，新的活性肽不断发现，对活性肽功能认识不断增长，促使这一领域迅速发展 肽的应用和发展 * 1．纸层析法 2．薄层层析法 3．离子交换柱层析法 4．高效液相层析法 氨基酸的分离与分析 1. 分配层析法： 分配系数 Kd = CA CB CA：一种物质在A相（流动相）中的浓度 CB：一种物质在B相（固定相）中的浓度 原理：主要根据被分析的样品（如aa混合物）在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的目的， 氨基酸的分离与分析 （1）纸层析 单向纸层析图 Rf值 双向纸层析图 固定相：纤维素上的水 流动相：有机溶剂 第一相展层剂：丁醇-乙酸 第二相展层剂：酚-甲酚-水 （2）薄层层析 支持剂：纤维素粉、硅胶、氧化铝粉等 2．离子交换层析法 原理：分离氨基酸时，用离子交换树脂作为支持物，利用离子交换树脂上的活性基团与溶液中的离子进行交换反应，由于各种离子交换能力不同，与树脂结合的牢固程度就不同，在洗脱过程中，各种离子以不同的速度移动，从而达到分离的目的。 这种分离主要与各种离子所带电荷有关，在电荷相同时，与极性、非极性有关。 离子交换树脂 化学本质：是一种人工合成的聚苯乙烯一苯二乙烯组成的具有网状结构的高分子聚合物。 外观： 颗粒状 阳离子交换树脂：活性基团是酸性的，如磺酸基-SO3H （强酸型），羧基-COOH（弱酸型） 阴离子交换树脂：活性基团是碱性的，如季胺基- N+(CH3)3OH- 采用改变pH值或者增加盐浓度的方式进行洗脱各种氨基酸 高效液相层析 (high performance liguid chromatography, HPLC) HPLC的特点: （2）反相层析 (reverse phase chromatography) （1）离子交换层析 （3）凝胶过滤 理论塔板高，分辨率好，可使氨基酸分析的灵敏度达到10-12mol水平 用强酸性阳离子交换树脂分离下列每对氨基酸，当用pH7.0的缓冲液洗脱时，下述每对氨基酸中先从柱上洗脱下来的是那种氨基酸？ （1）天冬氨酸和赖氨酸，（2）精氨酸和甲硫氨酸， （3）谷氨酸和缬氨酸， （4）甘氨酸和亮氨酸， 习 题 Asp净电荷为负，Lys静电荷为正，Lys与树脂磺酸基相反离子吸附作用大，故 Asp ? Lys 2. Arg净电荷为正，Met静电荷接近零，故 Met ? Arg 3. Glu净电荷为负，Val净电荷接近零，故 Glu ?Val 4. Gly和Leu净电荷都接近零，但Leu的非极性侧链与树脂骨架之间的非极性相互作用大，故 Gly ? Leu 答 案 氨基酸的制备 制备氨基酸有4种途径： 从蛋白质水解液中分离提取 应用发酵法生产 应用酶的催化反应生成氨基酸 有机合成法 适宜于中 小规模的生产 可大规模 生产 氨基酸的制备和应用状况 蛋白质的水解 酸水解 6M HCl 或 4M H2SO4, 105~110?C回流20h左右可完全水解，其优点是不引起消旋化，得到L-氨基酸。缺点是Trp完全破坏，羟基氨基酸(Ser,Thr)部分被分解，Asn和Gln的酰胺基被水解 碱水解 5M NaOH共沸10~20h，大多数氨基酸遭到不同程度破坏，产生消旋化，引起Arg脱氨生成鸟氨酸和尿素，Trp不被破坏 酶水解 不产生消旋化，也不破坏氨基酸，水解不彻底，需要多种酶协同作用，费时较长，常用于部分水解，常用的酶有胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶等 氨基酸的用途 蛋白质的基本组成 对生物体具有其他特殊的生理作用， 参与许多代谢作用，不少已用来治疗疾病 用于食品强化剂、调味剂、着色剂、甜味剂和增味剂 用于饲料添加剂 调节皮肤pH值和保护皮肤的功能 氨基酸的制备和应用状况 三、肽 肽的基本概念 肽命名 生物体内重要的活性肽 肽类的应用和发展前景 肽的基本概念 ? 肽是由两个或两个以上的氨基酸通过肽键连接而形成的化合物，氨基酸之间脱水后形成的键称肽键（酰胺