大熊猫核糖体蛋白L10亚基基因(RPL10)的cDNA-第三军医大学学报.docVIP

大熊猫核糖体蛋白L10亚基基因(RPL10)的cDNA克隆及序列分析 苏秀兰，侯怡玲，李俊，孙冰，吴光富，宋嫣，张田，侯万儒（637002 四川南充，西华师范大学生命科学学院） [摘要] 目的 了解大熊猫(Ailuropoda melanoleuca) 核糖体蛋白亚基RPL10 基因的结构特点及其与已报道的人和其他哺乳动物核糖体蛋白亚基RPL10 基因的异同。 方法 根据已报道的部分哺乳动物核糖体蛋白L10亚基基因(RPL10)的相关信息设计引物，运用RT-PCR技术，从大熊猫的肌肉组织总RNA 中对核糖体蛋白亚基RPL10 基因的进行克隆、测序；采用Genescan 软件，对所克隆的基因序列进行氨基酸序列推定；采用ORF finder软件进行DNA 序列的开放阅读框(open reading frame ，ORF) 查找；采用DNAMAN Version 6软件，对基因序列和氨基酸序列进行同源性比较；采用Ex2PASy Proteomics Server 软件，进行蛋白质功能位点和生化特性预测分析；采用http://www.imtech.res.in/raghava/apssp2/对蛋白质二级结构进行模拟分析 结果 大熊猫RPL10 基因的表达序列长为685bp，开放阅读框(ORF)为645 bp，编码214个氨基酸的蛋白质，该蛋白的相对分子质量为24.5997 kDa，等电点为10.74，含有4个功能位点，分别为：2个蛋白激酶C磷酸化位点，2个N化位点，2个酰胺化RPL10基因的序列、结构、功能位点，还是从其编码的氨基酸的序列和二级结构进行分析，都表明大熊猫的RPL10蛋白基因和已报道的哺乳动物的RPL10 蛋白基因具有高度的遗传稳定性和功能一致性。 [关键词] 　大熊猫； RT-PCR；RPL10； 克隆； 序列分析 Supported by the National Natural Science Foundation of China , Corresponding author: Hou Wanru, E-mail：hwr168@ 核糖体是细胞合成蛋白质的细胞器，主要成分是蛋白质和RNA，其主要功能是按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确的合成蛋白质多肽链。真核生物的核糖体中约有80 种核糖体蛋白亚基[1]，其中核糖体蛋白的命名与蛋白在核糖体的大小亚基有关，小亚基（40S 亚基）核糖体蛋白命名为S1至S31，大亚基（60S 亚基）核糖体蛋白命名为L1 至L44[2-3]。核糖体RPL10 是60S 亚基的组成部分，属于核糖体蛋白L10e家族成员。研究表明，核糖体蛋白基因RPL10的突变与自闭症的发病机制有关[4]。 以国宝著称的大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)是世界上现存最古老的物种之一，也是我国特有的珍贵稀有动物，属国家一级濒危保护动物。长久以来，其生存和保护现状一直为世人所关注的焦点，国内外学者从繁殖、生理和细胞等方面对大熊猫开展了大量的研究[5-7]。目前，国内外对大熊猫基因的研究报道已有多篇[8-15]，但并未见到关于RPL10基因的报道。本研究根据人（Homo sapiens）、牛(Bos Taurus)、家犬(Canis familiaris)、褐家鼠（Rattus norvegicus）、小家鼠 [基金项目] 国家自然科学基金资助项目 ; 四川省应用技术资助项目 (2006J13-057); 四川省教育厅重点科研项(07ZA120); 四川省重点学科动物学建设经费资助 (404001)；四川省应用基础项目（2009JY0061）;四川省教育厅青年基金项目（092B088） [通信作者] 侯万儒，E-mail：hwr168@ (Mus musculus)5个哺乳动物物种RPL10基因设计引物大熊猫RPL0基因扩增为开展大熊猫分子生物学研究，尤其为RPL0结构基因的克隆与比较研究提供基础资料- 70 ℃备用。 1.2.2　引物设计及RT-PCR 　 从GenBank 数据库中检索到人（Homo sapiens，NM_006013）、牛(Bos Taurus，NM_174760 )、家犬(Canis familiaris，XM_862548)、褐家鼠（Rattus norvegicus，NM_031100）、小家鼠(Mus musculus，NM_052835) 5个哺乳动物物种RPL10基因的mRNA序列，根据序列Primer Premier 5.0软件对引物进行设计后，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，所设计引物编