第2章蛋白质高级结构、性质及分离纯化.ppt

研究蛋白质构象的方法 X射线衍射法 紫外差光谱 荧光和荧光偏振 圆二色性法 核磁共振 X射线衍射法 入射的x射线投射到被检物体上引起光波的散射，散射光含有物体构造的全部信息，用透镜收集和重组散射光波产生物体的放大图像。 核磁共振（NMR） 核磁共振的方法与技术作为分析物质的手段 ，由于其可深入物质内部而不破坏样品 ，并具有迅速、准确、分辨率高等优点而得以迅速发展和广泛应用 ，已经从物理学渗透到化学、生物、地质、医疗以及材料等学科 ，在科研和生产中发挥了巨大作用 。 核磁共振是1946年由美国斯坦福大学布洛赫(F.Block)和哈佛大学珀赛尔(E.M.Purcell)各自独立发现的，两人因此获得1952年诺贝尔物理学奖。50多年来，核磁共振已形成为一门有完整理论的新学科。 核磁共振基本原理 核磁共振原理 实现核磁共振的两种方法 检测共振信号的方法 傅里叶(Fourier)变换 共振条件：? = ?0 = ??0 实现核磁共振的两种方法 核磁共振新技术 核磁双共振 二维核磁共振 NMR成像技术 魔角旋转技术 极化转移技术 NMR成像技术 投影重建成像方法 Fourier成像方法 弛豫时间成像方法 逐点扫描方法 线扫描方法 切片扫描方法 高分率成像和快速成像法 蛋白质分子中的非共价键： （1）氢键： 羧基上的氧与亚氨基上的氢原子所形成。 作用：链内维持二级结构；链间为三、四级结构所需。 （2）疏水键：aa非极性侧链形成。 作用：维持三级结构。 （3）盐键： 带正负电荷的侧链通过静电引力形成。 （4）范德华力： 中性分子或原子间的作用力。 次级键的特点与作用 键能弱； 数量多。 所以，在维持蛋白质空间结构中起重要作用。 酰胺平面与二面角 蛋白质的二级结构 指蛋白质多肽链本身的折叠和盘绕形式；蛋白质分子中邻近的氨基酸之间由于氢键的作用盘旋折叠形成的立体空间结构。包括： α- 螺旋结构 β- 折叠结构 β- 转角结构 自由回转 （1） α- 螺旋(α-helix) 因肽链中aa残基中的-NH与前三个aa的C=O间可形成氢键，使得肽链呈螺旋状盘曲。 氢键取向几乎与中心轴平行。 ③蛋白质分子大多为右手?-螺旋。 ④亲水基团位于螺旋的外侧，疏水基团位于螺旋的 内侧。 影响α- 螺旋稳定的因素 蛋白质的氨基酸组成是主要的影响因素： Pro 同种电荷 （2） β-折叠(β-pleated sheet) 结构特点： 肽链伸展，按层排列, 在肽链的不同区段或不同肽链间形成氢键,维持结构的稳定性。 ?-折叠 ?-折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成的。肽链的主链呈锯齿桩折叠构象。 ①在?-折叠中，?-碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的R基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸之间的轴心距为0.35nm. ② ?-折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接近垂直。 ③?-折叠有两种类型。一种为平行式，即所有肽链的N-端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。 β-折叠有两种类型 平行：所有肽链的N端处于同一端，氢键不与肽链走向垂直。如： β- 角蛋白。 反平行式 平行式 （3）β- 转角(β- turn) 链内形成氢键，多肽链出现180°的回折。此回折角称β- 转角结构。 此结构广泛存在球状蛋白中。 β- 转角 （4）自由回转(random coil) 亦称无规则卷曲、自由绕曲 指无规律的松散肽链结构。通常酶蛋白的功能部位在此。 超二级结构(supersecondary structures) 结构域(domains)： 多肽链在超二级结构基础上进一步绕曲折叠而成的相对独立的三维实体称结构域。 具有部分生物学功能。 几种常见的结构域 蛋白质三级结构 概念：　蛋白质的三级结构是指多肽链在二级结构的基础上进一步盘旋、折叠，从而生成特定的空间结构。 包括主链和侧链的所有原子的空间排布．一般非极性侧链埋在分子内部，形成疏水核，极性侧链在分子表面． 较小蛋白质分子：多为单结构域，即三级结构； 较大蛋白质分子：由2或2个以上结构域结合成三级结构。 蛋白质的四级结构 亚基：几条肽链以非共价键联结成一稳定的活性单位，这种肽链称该蛋白质的亚基(subunit)。 四级结构：亚基间通过非共价键聚合而成的特定构象。 亚基单独存在不具活性 蛋白质的四种结构层次 蛋白质的一级结构 蛋白质分子中氨基酸残基的排列顺序。 蛋白质的空间结构