实验四细胞膜的通透性及细胞活体染色技术.ppt

实验四 细胞膜的通透性及细胞活体染色技术 细胞膜的通透性 细胞活体染色技术 一、实验目的 二、实验原理 细胞膜是防止细胞外物质自由进入细胞的屏障，具有选择通透性。它保证了细胞内环境的相对稳定，使各种生化反应能够有序运行。 但是细胞 必须与周围环境发生信息、物质与能量的交换，才能完成特定的生理功能。 三、实验用品 用品：小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、注射 器、秒表等 材料：含适量肝素的兔血或鸡血 试剂：1 M乙二醇水溶液、 丙三醇水溶液、葡萄糖水溶液、3M丙醇、1/8 M、1/9 M、1/10 M、1/12 M、1/14 M 葡萄糖溶液，1/12 M、1/14 M、1/16 M、 1/18 M NaCl溶液 四、实验步骤 1.相对分子质量大小对膜通透性的影响 在编号的三支试管中，分别加入2ml的1mol/L 等摩尔浓度的乙二醇、丙三醇、葡萄糖高渗液；分别滴加两滴血液，用手指按住管口，倒置一次；晃动试管观察溶血时间，最长延长至10min。 2 . 脂溶性大小对细胞膜通透性的影响 在3 支试管中，各加入3mol/L甲醇、乙醇、丙醇溶液2ml 后，分别滴加血液2 滴，用手指按住管口，倒置一次，并观察溶血现象，记录各管的溶血时间。 一、实验目的 学习细胞活体染色的方法 观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布 二、实验原理 一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但是，有一些染料（称“活体染料”）却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响或很少影响细胞的生命活动。 较为常见的活体染色剂 中性红:一种弱碱性 pH 指示剂，变色范围pH6.4～8.0之间（由红变黄）。 在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，液泡在一般情况下呈酸性反应，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色. 死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液泡内，因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象，相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。 三、实验用品 材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠 器械：显微镜、镊子、剪刀、刀片、解剖针、表面皿、载破片、盖玻片、吸管。吸水纸等 试剂：Ringer氏液、1/3000 中性红染液、1/5000 Janus green B 、台盼蓝染色液、香柏油、二甲苯、蒸馏水等 四、实验步骤 1. 液泡系的中性红活体染色 2.线粒体的活体染色 3.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 4. 台盼蓝染色鉴定细胞死活 It’s over. Thanks! * * 了解相对分子质量、脂溶性大小、电解质和电解质溶液对细胞膜透性的影响 血红蛋白从红细胞中逸出的现象称为溶血现象。渗入红细胞的溶质能提高红细胞渗透压，使水进入红细胞，引起溶血及细胞膜破裂。此时光线较容易通过溶液，使溶液呈现透明即溶血。 溶血后 未溶血 溶血现象可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。溶血现象的快慢与进入细胞的物质分子量大小有关。 非极性化合物易溶于脂溶剂，但在水中溶解度很小。碳链越长，脂溶性越大。 分配系数 —— 一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中溶解度之比 各种非电解质溶液，只要单位体积中的分子数相同，渗透压亦相同。 若电解质溶液，如NaCl与葡萄糖分子数相同时，NaCl的渗透压要大得多。 等渗系数 —— 具有相同渗透压的某非电解质溶液与某电解质溶液浓度之比 发生溶血前的一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗溶液。 溶液 相对分子质量 溶血时间 1mol/L异丙醇 62 1mol/L丙三醇 92 1mol/L葡萄糖 180 溶液 相对分子质量 分配系数 溶血时间 3mol/L甲醇 32.04 0.0097 3mol/L乙醇 46.07 0.0357 3mol/L丙醇 58.0 0.156 在16 支试管中，各加入不同浓度的葡萄糖及氯化钠溶液2ml 后，分别滴加血液2 滴，轻轻摇动试管，室温放置15min，观察发生溶血的浓度，确定等渗浓度，并计算等渗摩尔系数。 溶质 物质的量浓度/(mol/L) 葡萄糖 NaCl 1/8 1/13 1/10 1/12 1/9 1/16 1/14 1/18 3 . 电解质和非电解质对细胞通透性的影响 詹纳斯绿：专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧