实验细菌的荚膜染色.pptVIP

实验六 细菌的荚膜染色法 实验的目的要求 学习并掌握荚膜染色法 荚膜染色的基本原理 荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。 由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托法染色(负染色法),使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。 也可采用Anthony氏染色法，用结晶紫使细胞和荚膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗。荚膜被脱色，但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体区分。 实验材料 方法 湿墨水法 干墨水法(P78) Anthony氏法(P79) 湿墨水法 制备细菌墨水混合液 加盖玻片 镜检 制备细菌墨水混合液 加盖玻片 镜检 干墨水法 制备细菌墨水混合液 涂片 固定 染色 镜检 制备细菌墨水混合液 涂片 固定、干燥 染色 镜检 Anthony氏法 制片 固定 染色 镜检 制片、固定 染色 镜检 * 菌种 胶质芽孢杆菌 试剂 绘图墨水 1%甲基紫水溶液 6%葡萄糖水溶液 20%硫酸铜水溶液 甲醇 香柏油 二甲苯 仪器和用具 载玻片 盖玻片 滤纸 显微镜 镜头纸 1、滴绘图墨水 2、制备混合液 绘图墨水 滴1滴绘图墨水在载玻 片中央 挑取少量菌苔 与墨水混 合均匀涂布 在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液 1、加盖玻片 将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片 2、吸去多余液体 勿留气泡 1、镜检 用低倍镜高倍镜观察 制片置显微镜载物台上 2、结果： 背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。 1、滴葡萄糖溶液 2、涂片 6%葡萄糖 在载玻片一 端 滴一滴6% 葡萄糖水 挑取少量菌苔 混匀后再加一环墨水，再次混匀 1、先将推片一 端放在混合液上 2、将推片向另 一端平行滑动 3、使混合液 均匀铺成薄层 4、干燥 室温自然晾干 甲醇固定，自然干燥 甲醇 滴甲醇浸没涂片1分钟 倾去甲醇，室温自然干燥 注意：固定及干燥均不能加热和用热风吹干，因为荚膜含水量高，加热会使其失水变形。 同时，菌体失水收缩，会与周围染料脱离产生透明区，导致不产荚膜的细菌被误认为有荚膜。 1、滴甲基紫染液 2、水洗 不要直接冲菌膜 甲基紫染液 甲基紫染液染色1-2分钟 3、自然干燥 1、镜检 用低倍镜高倍镜观察 制片置显微镜载物台上 2、结果： 背景灰黑色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。 生理盐水 1、滴生理盐水 挑取少量菌苔 与生理盐水混匀 均匀涂布 2、涂片 滴半滴生理 盐水在载玻 片中央 3、干燥固定 室温自然晾干 1%结晶紫染液 1、滴孔结晶紫染液 滴结晶紫染 色2分钟 3、脱色 20%CuSO4水溶液