第章半合成β内酰胺环类抗生素.pptVIP

半合成β-内酰胺环类抗生素 化工学院 卢余盛 主要内容 一、天然和半合成抗生素的比对 二、生物合成半合成抗生素的基本原理 三、生物合成半合成新青霉素 四、生物合成半合成新头孢菌素 一、天然与半合成青霉素的对比 天然青霉素G 侧链R 母核 优点 抗革兰氏阳性菌力强，对敏感的G+菌引起疾病是临床首选药物 毒性低，计量高达6000万单位，治疗数量时亦无不良反应（过敏者除外）。 缺点 对革兰氏阴性菌无效 不能口服 排泄快 对过敏病人微量也危险 易产生耐药性 人工改造青霉素 二、天然头孢菌素C 侧链1 母核 侧链2 人工改造新头孢菌素 1、苯乙酰基头孢菌素 抗菌活力比头孢菌素C大100倍 2、唑啉头孢菌素 广谱,对G-性菌作用较强,注射后,血浓度高组织分布广 单环β-内酰胺环类抗生素 单细酰胺环素 生物合成半合成β-内酰胺环类抗生素的基本原理 将不同微生物来源的酰基转移酶在不同pH等条件下将天然的β-内酰胺环类抗生素的酰基侧链进行水解获得母核，然后同样在不同类型酰基转移酶的各种pH等条件进行催化，将经过化学结构修饰的不同酰基侧链与母核重新酰基化，形成具有各种药理作用特色的新抗生素。 酰基转移酶 酰基转移酶(acyltransferase,AT)在β-内酰胺环类抗生素的末端生物合成中或者是在人工半合成新β-内酰胺环类抗生素的酶法合成中都是关键性酶。 它是一个酶蛋白,分子量为40kDa,由两个不同亚单位（α β杂二聚体）所组成，分子量分别为11kDa和29kDa，二者是编码在同一个青霉素末端生物合成基因（Pen,DE）的同簇酶，位于微生物微粒体（Microbodies）中。 催化条件:碱性条件适宜水解，酸性条件适宜于缩合酰基侧链. 底物:青霉素、头孢菌素、酰胺、羧酸和氨基酸酯以及其他相关的物质. 它是一种特异性较广的酶. 不同来源微生物酶具体酶的催化条件不同 背景 由于青霉素类抗生素有疗效的必要母核6-氨基青霉烷酸(6-APA)对酸、碱不稳定，难以化学合成。 基本途径： 以青霉素G为原料制取6-APA 固相酶法 增强酶的稳定性，克服酶在溶解状态较易受抑制的影响，可使操作连续化，可提高裂解基质浓度，产物分离精制简便。 固定化细胞法 缺点:易产生过敏反应.(由于产品中含有的青霉噻唑酸与蛋白质形成的青霉噻唑酸蛋白所产生的)，而固相酶法中的酰基酶都被载体结合而稳定，不再有蛋白质释放到反应液中去. 以青霉素V为原料制取6-APA 优点: 青霉素V在水溶液中比青霉素G稳定，特别在pH低的情况下更稳定.有利于提高6-APA的产量和减少原料的破坏. 青霉素V酰基转移酶的产生菌能耐受高浓度的苯氧基乙酸，有利于进一步提高青霉素V的发酵单位和通过诱导获得高单位生产菌株，以生产更多的6-APA和降低原料成本. 从PGA和PVA的最适pH(PGA:pH7.8-8.5 PVA: pH5.6-8.5)看,因为青霉素在pH为6.0-7.0时, 降解率都很低,为此应用真菌的PVA酶水解时，不仅便于缓冲，并且又显示了较小的产物抑制作用,有利于工艺和获得高浓度的产品6-APA. PVA酶法生产6-APA 青霉素V酰基转移酶(PVA) 产PVA的微生物 胞内:如球形芽孢杆菌等.胞内酶---固定化细胞 胞外:如链霉菌等.胞外酶---固定化酶 高产菌株的选育 主要采用紫外线，γ-射线和甲磺酸乙酯处理 理化性质 分子量 亚单位结构与一级结构来自不同微生物来源的PVA的分子量为58-356kD之间. 最适pH值与温度 PVA的最适pH值与温度由不同来源微生物而异，来自各类不同微生物产生的PVA的最适温度相差较大 底物特异性 最佳底物为青霉素V,其次是头孢菌素V(头孢烷酸V).此外,有些菌株的PVA还能水解对羟基青霉素V,青霉素G,苯氧基乙酰胺等. 酶法合成半合成新青霉素 菌丝体悬浮法 青霉素酰基酶的缩合反应一般是在酸性条件下进行的. 注意: 1 采用不同微生物来源的青霉素酰基转移酶对不同结构的底物亲合力不同. 2 微生物同时会产生青霉素酶破坏合成的新青霉素,因此需要加邻二氮杂菲(1mmol)或硫脲(100mmol)等青霉素酶的抑制剂,或者选育缺失青霉素酶的变种来进行生产. 酶法合成氨苄青霉素 固相酶和固定化细胞法 背景 试验表明，如果头孢菌素C的侧链以苯乙酰基(即青霉素G的侧链)取代，其抗菌作用比头孢菌素