生物催化的介质系统xu.ppt

生物催化工程;第五章 生物催化的介质系统;1.生物催化的介质系统概述 ;;构象工程 (Conformational Engineering);;介质工程;有机介质中生物催化的优点 ; 可防止由水引起的副反应 可扩大反应pH值的适应性 酶易于实现固定化 酶和产物易于回收 可避免微生物污染;溶剂1;2. 可调控酶的底物专一性;3． 可改变反应平衡的移动方向;4． 可防止由水引起的副反应;;2.典型的生物催化介质系统 ;水或缓冲溶液系统； 水-有机溶剂单相系统 水-有机溶剂两相系统; 乳状液或微乳液系统 微水有机溶剂单相系统; 超临界流体系统 离子液体介质系统 无溶剂反应系统 双水相系统; 浊点系统 ;2.1 单一的水或缓冲溶液系统 ;pH 4.0 活性提高 pH 2.2 选择性提高;2.2 均相水-有机溶剂系统 ;2.3 水-有机溶剂两相系统 ;2.3 水-有机溶剂两相系统 ;水-有机两相体系;2.4 乳状液或微乳液系统 ;逆胶束系统是含有表面活性剂与少量水的有机溶剂系统。表面活性剂分子由疏水性尾部和亲水性头部两部分组成，在含水有机溶剂中，它们的疏水性基团与有机溶剂接触，而亲水性头部形成极性内核，从而组成许多个逆胶束，水分子聚集在逆胶束内核中形成“微水池”，里面容纳了酶分子，这样酶被限制在含水的微环境中，而底物和产物可以自由进出胶束。 ;①组成的灵活性：大量不同类型的表面活性剂、有机溶剂甚至是不同极性的物质，都可用于构建适宜于酶反应的逆胶束系统； ②热力学稳定性和光学透明性：逆胶束是自发形成的，因而不需要机械混合，有利于规模放大； ③逆胶束有非常高的比界面积：远高于有机溶剂-水两相系统，使底物和产物在相间的转移变得极为有利； ④逆胶束的相特性随温度而变化：这一特性可以简化产物和酶的分离纯化。例如马肝醇脱氢酶在AOT或C12E5逆胶束系统中催化4-甲基环己酮还原生成4-甲基环己醇，反应后通过温度诱导可使产物回收到有机相中，而酶、辅酶在水相中，并可多次循环反复使用，每一次循环酶活性损失很小。 逆胶束中的酶催化反应可用于油脂水解、辅酶再生、消旋体拆分、肽和氨基酸合成和高分子材料合成。色氨酸合成可采用色氨酸酶催化吲哚和丝氨酸缩合而成，由于吲哚在水中溶解度很低、且对酶有抑制作用。Eggers运用Brij-Aliguat 336-环己醇为逆相胶束系统，建立了膜反应器中逆胶束酶法合成色氨酸的生产工艺。;J Mol Catal B: Enzymatic 2000;2.5 微水有机溶剂单相系统;固相酶在结构上仍是柔性的，酶分子内部的柔性足以保证酶和底物结合时酶能产生微小的构象变化，形成酶和底物结合的中间复合体。酶分子的比表面积约为(1～3)×106 m2·kg-1，与活性炭相当，酶分子体积的1/3～2/3是空的，充满了溶剂，因此足够的搅拌将保证底物能与酶表面或内部的活性中心结合，并起催化反应。;一般而言，酶在微水有机溶剂体系中稳定性较好，但催化活力要比水相中低得多，部分原因是因为酶在有机相不溶，许多酶分子聚结成团，影响了颗粒内部酶分子的催化效率。因此，如何保持固态酶粉在有机相中的高度分散状态，成为激活有机相酶活力的一项重要课题。;;2.6 超临界流体系统 ;超临界流体对多数酶都能适用，酶催化的酯化、转酯、醇解、水解、羟化和脱氢等反应都可在此体系中进行，但研究得最多的是水解酶的催化反应。这种溶剂体系最大的优点是无毒、低粘度、产物易于分离。 该体系的缺点是需要有能耐受几十个兆帕的高压容器，并且减压时易于使酶失活。此外，有些超临界流体如二氧化碳可能会与酶分子表面的活泼基团发生反应而引起酶活性的丧失;2.7 离子液体介质系统 ;与普通有机溶剂最大的区别在于：① 离子液体不会挥发(没有蒸气压)，对环境比较友好，用于工业生产也相对比较安全；② 它们与许多有机溶剂互不相溶，可以形成有机溶剂-离子液体两相系统或者有机溶剂-水-离子液体三相系统，从而为溶剂工程在生物催化反应中的应用提供了新的可能。 ;;2.8 无溶剂或寡溶剂反应系统 ;例如，在用脂肪酶催化各种手性醇的对映选择性转酯化反应中，经常使用过量的醋酸乙烯酯或醋酸异丙烯酯作为酰基供体，同时兼作反应介质(无需外加溶剂)，一般效果非常好，已在工业规模广泛应用. ;3.非水介质系统中的影响因素;3.1 溶剂的影响 ;非水溶剂对酶选择性的影响 ;非水溶剂对酶稳定性的影响;有机溶剂能增加酶构象的刚性，尤其是在低水含量的疏水性有机溶剂中，从而提高酶的热稳定性。 由于疏水溶剂基本上不与蛋白质发生反应，因此悬浮于疏水介质中的蛋白质的热稳定性通常要高于在亲水介质中的稳定性。 酶在有机溶剂中的稳定性与冻干前水溶液的pH、盐的浓度以及是否存在底物类似物等因素有关。 ;非水溶剂的选择原则 ;