植物组织培养技术第三章第四章植物器官的培养.ppt

制作者：吴翠云 植物器官的培养 第三章 培养物的脱分化与再分化 理论基础： 1、植物细胞的全能性： 2、植物细胞的全能性应用：用人为的方法创造出一个适合于生长发育的理想条件（无菌条件、碳源、无机营养、有机营养、植物生长调节剂、ph、温度光照等），使细胞的全能性得到充分发挥。一般情况处于无菌条件，靠人工的营养及激素条件进行代谢，使细胞处于异样状态，一个分生组织可通过三个途径实现细胞的全能性。1）由分生组织直接分生芽而达到快速繁殖的目的，这种情况极少发生细胞无性变异；2）由分生组织形成愈伤组织，经过分化实现细胞全能性；3）游离细胞或原生质体形成胚状体，又胚状体直接重建完整植株。 在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织的形成和形态的发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。因此，脱分化、再分化是植物组织培养中必不可少的两个基本过程。 脱分化：指已分化的外植体细胞（组织、器官），在切割损伤和培养物内外因素的共同作用下，逐渐丧失其原有的分化结构和功能，最后形成细胞团或愈伤组织的过程。再分化则是指离体培养物由脱分化状态再度分化的过程。 3、外植体的脱分化：外植体细胞应激于损伤和离体培养而出现的脱分化，使培养物细胞在结构上可见到的第一个变化。脱分化的细胞在一定条件下可进行不断分裂和生长，也可不经分裂而直接在分化为其他类型的细胞或胚状体。 与脱分化 有关的因子及其作用：1）损伤刺激，损伤首先导致外植体产生生化反应，其次导致呼吸活性的变化，还会导致很多酶活性的增加。2）培养细胞的异质性，异质性细胞对培养条件刺激有不同的敏感性，能脱分化以至分裂 3）生长物质的影响，加入一些植物生长调节物质，可导致外植体细胞在细胞生物学上与细胞分裂有关的一些强烈变化 4）光线的影响 4、愈伤组织的形成与调控：1）愈伤组织的形成过程，外植体中已分化的活细胞，在外源激素的诱导下通过脱分化后形成愈伤组织，这一过程可分为3个时期a诱导期，使外植体细胞进行分裂准备的时期，这一时期外植体细胞大小没有多大变化，但细胞内合成代谢活跃，细胞核体积明显增大。诱导期的长短有一系列内外因素决定b分裂期，经诱导期之后，外植体外层细胞开始迅速分裂，但外植体中间部分的细胞不分裂，这一时期由于细胞分裂的速度大大超过了细胞伸展的速率，细胞体积迅速变小，逐渐回复到分生状态，这个过程即为脱分化。脱分化细胞不断分裂，从而形成了愈伤组织。愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质的枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累必须转到新鲜的培养基上培养，这个过程叫做继代。通过继代培养，可是愈伤组织无限期的保持在部分化的增殖状态，若让愈伤组织留在原来的培养基上继续培养而不继代，他们则会不可避免的发生分化 处于分裂期的愈伤组织的特点：细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明 c形成期，细胞分裂由原来的局限在组织外缘的平周分裂转为组织内部较深层局部细胞的分裂，结果形成了瘤状或片状的拟分生组织，称为分生组织结节，分生组织结节可以成为遇上组织的生长中心，或进一步分化为维管组织结节 5、愈伤组织的生长于调控：试验表明愈伤组织的生长发生在不与培养基接触的表面。优良的愈伤组织至少具备以下特征：1）有旺盛的自我增殖能力2）容易散碎3）具有高度的胚性或再分化能力4）经过长期保存而不丧失胚性。为达到上述目的，在诱导愈伤组织时通常采取以下措施：1）选择适当的外植体2）选择正确的培养基3）采取特殊的物理或化学因素来改变愈伤组织诱导培养基和培养条件 6、培养物的再分化：有两种途径1）胚胎的发生2）直接分化器官，再形成植株。大多为 第二种情况，即先出现细胞分化和组织分化，进而分化器官，形成植株。 细胞分化和组织分化，细胞分化是指导致细胞形成不同结构、引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。组织分化指在细胞分化的基础上，进一步分化出各种各样的组织 7、器官分化和植株的形成，器官分化的结果是导致器官原基的形成，不同的器官原基则会分化成不同的器官，分化的器官中最主要是茎和根，它们分化的结果常导致完整植株的形成。在组织培养中通过芽或根形成植株的方式有三种：1）先产生芽，芽伸长后再在茎的基部长根形成完整的植株2）先长根，再长芽3）在愈伤组织的不同部位形成根和芽 第四章 植物器官的培养 器官培养 包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养。以器官作为外植体进行离体培养，是植物组织培养中最主要的一个方面，进行的植物种类最多，应用的范围也最广。 植物器官的培养 器官培养的意义： 1. 器官培养是研究器官生长、营养代谢、生理生化、组织分化和形态建成的最好材料和方法； 2.器官培养在生