细菌药敏试验及其耐药表型检测.ppt

3_jhindler China 2009 GP * Hypothesized transfer of vanA (two-step process) 3_jhindler China 2009 GP * jhindler CLSI Taiwan Nov 08 * 3_jhindler China 2009 GP * 琼脂 * jhindler CLSI Taiwan Nov 08 * 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） 纸片法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL （筛选阳性）： 头孢泊肟≤17mm 头孢他啶≤22mm 头孢噻肟≤27mm 头孢曲松≤25mm 氨曲南 ≤27mm 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） 纸片法（表型确认试验） 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸。 任一复方制剂的抑菌圈直径与相应单药抑菌圈直径相差≥5mm时，即可判断该菌产ESBL。 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） 稀释法，出现以下一种情况即可怀疑该菌株产生ESBL： 头孢他啶或头孢噻肟或头孢曲松或氨曲南MIC≥2mg /mL 或头孢泊肟MIC≥8mg /mL 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs） 稀释法（表型确认试验） 头孢他啶和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟/克拉维酸。 任何一组酶抑制剂复方制剂的MIC值比相应单药的MIC降低3个稀释度者即可判定该菌为产ESBL菌株。 AmpC酶的特征 AmpC酶是在革兰阴性菌中发现的由染色体或质粒介导的水解头孢菌素的Ⅰ型β内酰胺酶，可分为诱导酶和非诱导酶。 与ESBLs不同的是，AmpC酶对三代头孢菌素耐药但对四代头孢菌素敏感且不被酶抑制剂克拉维酸所抑制，但其酶活性可被氯唑西林和硼酸抑制。 AmpC酶的检测方法 头孢西丁三维试验是检测AmpC酶的经典方法； 除此之外，还有以硼酸化合物为抑制剂检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶、AmpC Disk、头孢西丁琼脂基础法等。 碳青霉烯酶 碳青霉烯酶可以定义为具有水解碳青霉烯类抗生素活性的β-内酰胺酶，主要分布于β-内酰胺酶A、B、D类中。 根据水解机制中作用位点的不同可以将碳青霉烯酶分为两大类： 一类称为金属碳青霉烯酶，这类酶以金属锌离子为活性作用位点，可以被EDTA抑制，属于B类β-内酰胺酶； 另一类以丝氨酸（Ser）为酶的活性作用位点，可以被酶抑制剂克拉维酸和他唑巴坦所抑制，属于A、D类β-内酰胺酶。 碳青霉烯酶 A类酶 B类酶 D类酶 染色体编码：SME NMC IMI 质粒编码：KPC GES 质粒编码 OXA-23 OXA-24 OXA-51 OXA-58 OXA-55 OXA-48 OXA-50 OXA-60 OXA-62 金属酶，位于GMEs上，包括VIM，IMP，GIM，SPM，SIM等 可以被酶抑制剂抑制 可以被EDTA抑制 碳青霉烯酶表型检测方法-改良hodge试验 ATCC25922，0.5麦氏，1:10稀释涂MH平板 平皿中心贴10μg 厄他培南或亚胺培南纸片 10μl环挑取3 ～ 5个菌落从平板中心纸片边缘向平板边缘划线 被测菌株与大肠埃希菌ATCC25922 抑菌环交汇处大肠埃希菌生长增强，即产碳青霉烯酶。 改良hodge试验的结果判读 金属酶表型检测方法：EDTA协同试验 用0.5麦氏单位的待测菌悬液涂布M H 平板。 贴IMP (10μg)纸片．距其1cm 处贴EDTA纸片（0.5mol/L 4μl）。 35℃ 过夜培养。 亚胺培南抑菌圈在靠近加EDTA纸片侧明显扩大者为产金属酶菌株。 亚胺培南 EDTA 10mm 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）携带SCCmec基因盒。SCCmec基因盒中的MecA基因编码修饰的青霉素结合蛋白PBP2a，这种蛋白对甲氧西林和其他的β-内酰胺类抗生素亲和力下降，从而导致对这些抗生素的耐药。 耐甲氧西林葡萄球菌 耐甲氧西林葡萄球菌的检测 MRSA的检测方法有头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、乳胶凝胶试验检测PBP2a、mecA基因测定及MRSA显色培养基。 头孢西丁纸片法、苯唑西林琼脂稀释法是目前检测耐甲氧西林葡萄球菌最常用筛选方法。 对于金黄色葡萄球菌，MRSA的检测可以使用苯唑西林纸片，但对于凝固酶阴性葡萄球菌则不能使用苯唑西林纸片。 凝固酶阴性葡萄球菌中苯唑西林MIC结果的报告策略* 苯唑西林 MIC (μg/ml) 进行 mecA 或 PBP2a 或 头孢西丁纸片扩散 ≤0.25 ≥4.0 0.5-2.0 报告苯唑西林敏感 报告苯唑西林耐药 阴性 阳性 报告苯唑西林敏感 报告苯唑西林耐药 *检测无菌部位感染的 非表皮葡萄球菌菌株 克林霉素诱导耐药试验 克林霉素诱