第十一章转基因动物.ppt

第十一章 转基因动物 11.1 动物转基因技术 转基因动物的定义 1980年，耶鲁大学Gordon等将一种新的基因通过受精卵微注射的方法导入小鼠受精卵原核，1983年，Gordon和Ruddle将这种携带了新基因（外源基因）的动物称为转基因动物. 转基因动物: 通过实验手段将外源基因导入动物的受精卵或者胚胎干细胞中，使其发育成携带了外源基因并能表达和遗传的动物。 动物基因工程主要技术过程 1.外源基因的分离 2.外源基因与表达元件的重组 3.重组的外源基因导入生殖细胞或胚胎干细胞中 4.胚胎移植技术 5.转基因胚胎的鉴定及筛选 6.外源基因整合率及表达效率的检测. 转基因牛的构建方法： 1)从屠宰场杀死的母牛体内收集卵母细胞 2) 体外诱导牛卵母细胞 3) 用公牛精子使卵母细胞体外受精 4) 离心受精卵以除去卵黄（它的存在不利于用显微镜观察雄性原核） 5) 将转基因显微注入受精卵中 6) 体外培育受精卵至囊胚阶段 7) 将胚胎移植到母牛体内 8) 在子代中检测转基因产物，每2470个卵细胞可获得两头转基因小牛 转基因动物的方法 转基因动物 DNA显微注射法 磷酸钙共沉淀法 逆转录病毒感染法 动物+外源基因 腺病毒载体法 体细胞移植法 胚胎干细胞介导法 精子介导法 受体介导法 转基因动物的方法 (1）逆转录病毒感染法(逆转录酶) 利用逆转录病毒载体将外源基因转入动物胚胎早期细胞，与受体细胞核基因组整合，然后移植到受体动物中。 (2) DNA显微注射法 --体外构建外源基因 --通过激素使雌鼠超数排卵(促性腺激素)。 --从雌性输卵管内取出受精卵。 --利用显微注射仪将DNA注射入受精卵中。 --胚胎移植假孕母鼠输卵管内. 1974年,Jaemish创立. 转基因鼠的鉴定: Southern Blot Northern Blot Dot Blot Western Blot PCR (3)胚胎干细胞法 胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES)：哺乳动物囊胚期内细胞团中尚未进行分化的细胞，这种细胞具有类似癌细胞无限繁殖和高度分化的潜能. 该方法只限于小鼠 (4)精子载体法: 　直接用精子作为外源DNA载体的基因转移方法。 精子直接与外源DNA混合培养，外源基因可以进入精子头部，受精后能发育成转基因动物. 但其整合率低. 精子载体法步骤: 1.外源DNA导入精子 (DNA与精子共育法,电穿孔,脂质体转染) 2.体外受精 3.胞质内显微注射 (5)体细胞核移植法 1997年,英国,第一只转基因绵羊”多莉” 1998年,Gibelli,含LacZ的转基因牛 1999年,Alexander,人抗胰蛋白酶基因的转基因奶山羊. (6)? 受体介导的基因转移? ?早期胚胎中有胰岛素及胰岛素样生长因子IGFI和IGFll表达，外源性胰岛素促进细胞增殖及胚胎形态发生； 早期胚胎转化中最严重的问题: 试验中所用成分对胚胎的损伤或毒性。 采用胰岛素作为介入体优点: 1 不需显微操作， 2.使用的运载工具对胚胎无明显毒害作用。 (7).磷酸钙转染技术 1973年,F.L.Graham等建立 基本过程: 外源DNA+CaCL2 不断搅拌,缓慢加入 Hep