第十八章燃料和工业化学品.pptVIP

微生物工程与设备 湖师院生科院 第一节 谷氨酸 生物合成途径：糖经过酵解途径（EMP)和单磷酸己糖途径（HMP）生成丙酮酸。一方面，丙酮酸氧化脱羧生成乙酰-CoA，另一方面，经CO2固定作用生成草酰乙酸，两者合成柠檬酸进入三羧酸循环（TCA循环），由三羧酸循环的中间产物α-酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶催化下，还原氨基化合成谷氨酸。 合成途径包括EMP、HMP、TCA循环，乙醛酸循环（DCA）和CO2的固定作用。 总反应式 C6H12O6+NH3+3/2O2 C5H9O4N+CO2+3H2O 理论转化率：（147/180）×100%=81.7% 第十八章 燃料和工业化学品 谷氨酸的生物合成途径 CO2 第一节 谷氨酸 一、EMP和HMP 1. EMP途径 葡萄糖 丙酮酸 生成不同产物 2. HMP途径 6-磷酸葡萄糖在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下氧化生成6-磷酸葡萄糖酸，后者生成5-磷酸戊糖，通过戊糖代谢分解成3C化合物和2C化合物，3C化合物与EMP途径联系，2C化合物进入TCA. 第一节 谷氨酸 生物素充足菌：HMP途径所占比例为38% 生物素亚适量菌：HMP途径所占比例为26% 第一节 谷氨酸 一、EMP和HMP 二、TCA、DCA和CO2固定作用 1. TCA循环 α-酮戊二酸脱氢酶： 活力很弱，使糖代谢流进入TCA循环后受阻在α-酮戊二酸处，在有NH4+存在下，由谷氨酸脱氢酶催化还原氨基化生成谷氨酸 CO2 第一节 谷氨酸 2. DCA循环（乙醛酸循环） 作为TCA循环有缺陷时C4二羧酸的补充，特别是以醋酸和乙醇为原料的谷氨酸发酵，它是C4二羧酸的唯一补充来源 作为能量供给来源的末端氧化系 3C6H12O6 6丙酮酸 6醋酸 6醋酸 +2NH3+3O2 2C5H9O4N+2CO2+6H2O 转化率：2 ×147/（3×180）×100%=54.4% 二、TCA、DCA和CO2固定作用 第一节 谷氨酸 3. CO2固定 在谷氨酸产生菌中已检出两种CO2固定酶： 磷酸烯醇丙酮酸（PEP）羧化酶和苹果酸酶 PEP+CO2+GDP 草酰乙酸+GTP PEP羧化酶 丙酮酸 苹果酸 草酰乙酸 苹果酸脱氢酶 苹果酸酶 ±CO2 NAD+ NADH+H+ PEP羧化酶对PEP的表现亲和力约是丙酮酸激酶的1/10 二、TCA、DCA和CO2固定作用 第一节 谷氨酸 PEP浓度低 PEP易进入分解途径 乙酰-CoA浓度增加 与二磷酸果糖共同 激活PEP羧化酶 转向CO2固定 草酰乙酸 TCA循环中间产物浓度增加 抑制PEP羧化酶 防止过剩 乙酰-CoA氧化ATP水平提高 抑制丙酮 酸激酶 所以在谷氨酸发酵中，糖的分解代谢途径与CO2固定的适当比例是提高谷氨酸对糖收率的关键问题。 第一节 谷氨酸 三、氨的导入 糖代谢中间体α-酮戊二酸还原氨基化生成谷氨酸 天冬氨酸或丙氨酸通过氨基转移作用将氨基转给α-酮戊二酸而生成 谷氨酸合成酶途径 导入方式 柠檬酸 异柠檬酸 α-酮戊二酸 谷氨酸 NADPH+H+ NADP NH4+ 异柠檬酸脱氢酶：需NADP为辅酶，催化α-酮戊二酸的生成（谷氨酸的前体），并为谷氨酸脱氢酶提供辅酶 谷氨酸脱氢酶：需NADPH+H+为辅酶 活细胞中，异柠檬酸脱氢酶活性小于谷氨酸脱氢酶活性 第一节 谷氨酸 黄色短杆菌中，谷氨酸脱氢酶对α-酮戊二酸和谷氨酸表现出同促相互作用，低浓度的α-酮戊二酸和谷氨酸对此酶有显著的激活作用。 谷氨酸的生成被反应产物谷氨酸所抑制。 逆反应又被NH4+和α-酮戊二酸所抑制。 生物素缺乏菌 NH4+存在：葡萄糖消耗速度快，谷氨酸生成收率高 NH4+不存在：糖消耗速度慢，生成物是α-酮戊二酸、丙酮酸、醋酸和琥珀酸 生物素充足菌：NH4+几乎不影响糖代谢 生物素和NH4+对糖代谢的影响： 三、氨的导入 第一节 谷氨酸 20世纪70年代初，在细菌中发现了谷氨酸合成酶途径 谷氨酸合成酶对NH4+的亲和力比谷氨酸脱氢酶强的多。 谷氨酸发酵，细胞内的谷氨酸浓度高，反馈抑制谷氨酸脱氢酶活性，但不抑制谷氨酸合成酶 三、氨的导入 第一节 谷氨酸 在生物素贫乏和丰富培养基中生长的黄色短杆菌体内游离的和培养基中存在的氨基酸组成及洗涤影响 第一节 谷氨酸 四、菌种选育 在生物素贫乏培养基中积累大量谷氨酸，而在生物素丰富的培养基中几乎不积累谷氨酸 生物素贫乏的细胞内，谷氨酸含量少，而且容易被洗出，在生物素丰富的细胞内含