辅助改善记忆功能评价方法(征求意见稿)和修订说明.doc

附件2： 辅助改善记忆功能评价方法（征求意见稿） 保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目 1.1 动物实验 1.1.1 体重 1.1.2 被动行为试验：跳台实验，避暗实验 1.1.3 主动行为试验：穿梭箱实验，水迷宫实验，Morris水迷宫实验 1.2 人体试食试验 1.2.1 指向记忆 1.2.2 联想学习 1.2.3 图象自由回忆 1.2.4 无意义图形再认 1.2.5 人像特点联系回忆 1.2.6 记忆商 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验为必做项目。 2.2 动物实验强调被动行为试验和主动行为试验的组合，以保证实验结果的可靠性。 2.3 动物实验至少应选择三项实验，并且在被动行为试验、主动行为试验中至少要各选一项实验。 2.4 正常动物与记忆障碍模型动物任选其一。 2.5 动物实验应重复一次（重新饲养动物，重复所做实验）。 2.6 人体试食试验统一使用临床记忆量表。 2.7 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1动物实验：被动行为试验(跳台实验、避暗实验)二项实验中任一项实验结果阳性，主动行为试验（穿梭箱、水迷宫、Morris水迷宫实验）三项实验中任一项实验结果阳性，且重复实验结果一致（所重复的同一项实验两次结果均为阳性），可以判定该受试样品有助于改善记忆功能动物实验阳性。 3.2 人体试食试验：记忆商结果阳性，可判定该受试样品具有改善记忆的作用。  有助于改善记忆功能检验方法 Method for the Assessment of Assisting Memory Improvement Function 1 动物实验 1.1被动行为试验：跳台实验 1.1.1 原理 反应箱底铺有通36v电的铜栅，动物受到电击，其正常反应是跳上箱内绝缘的平台以避免伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台，如此训练5min，并记录每鼠受到电击的次数或叫错误次数，以此作为学习成绩。24h 或48h 重作测验，此即记忆保持测验。记录受电击的动物数、第一次跳下平台的潜伏期和3min 内的错误总数。停止训练5天后（也可以在训练后的一周、两周或其它时间点）进行记忆消退实验。 1.1.2 仪器与试剂 跳台仪：该装置为10×10×60cm3 的被动回避条件反射箱，用黑色塑料板分隔成5间。底面铺以铜栅，间距为0.5cm，可以通电，电压和电流强度由一变压器控制。每间左后角置一高和直径均为4.5cm的绝缘平台。最好采用附带隔音箱和视频分析系统的仪器。 试剂：樟柳碱、环已酰亚胺、乙醇。 1.1.3 实验方法 1.1.3.1 实验动物 推荐使用近交系小鼠。断乳鼠或成年鼠（18－22g）。用于改善老年人记忆的产品必须采用成年鼠。雌雄均可，单一性别，每组10-15只。 1.1.3.2 剂量设计和分组 实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍作为其中一个剂量组，另设两个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 1.1.3.3 实验步骤 1.1.3.3.1 受试样品对正常小鼠记忆的影响 末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。将动物放入反应箱内（台上、台下）适应环境3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以36v（或0.3-0.4mA）的交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台（绝缘体），以躲避伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台上。训练一次后，将动物放在反应箱内的平台上，记录5min 内各鼠跳下平台的错误次数和第一次跳下平台的潜伏期，以此作为学习成绩。24或48h 后进行重测验，将小鼠放在平台上，记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、各鼠3min 内电击次数和受电击的动物数总数，同时计算出现错误反应的动物的百分率（受电击的动物数占该组动物总数的百分率）。以上实验步骤为记忆获得过程。停止训练5天后（包括第5天）可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验（即记忆再现过程，方法同重测验）。 1.1.3.3.2 受试样品对记忆障碍模型小鼠的影响 1.1.3.3.2 1 模型制造 记忆获得障碍模型制造：训练前10min 腹腔注射樟柳碱或东莨菪碱5mg/kg BW； 记忆巩固障碍模型制造：训练前10min 腹腔注射环已酰亚胺120mg/kg BW； 记忆再现障碍模型制造：重测验前30min 灌胃30％ 的乙醇10mL/kg BW。 1.1.3.3.2.2 记忆测试的操作方法：同1.1.3.3.1。 1.1.4 数据处理及结果判定 潜伏期和