第八章mRNA剪接编辑.ppt

真核生物基因组DNA的结构 真核基因大多是断裂的: 一个基因可由多个内含子和外显子间隔排列而成。 内含子在真核基因中所占的比例很高，甚至超过99%。 部分人类基因中内含子序列所占的比重分析 断裂基因 hnRNA，hnRNP，sRNA Exons (外显子): the coding sequences Introns (内含子) : the intervening sequences RNA splicing: 去除pre-mRNA的内含子形成成熟mRNA的过程. Spliceosome 剪接体 Self-splicing introns and mechanisms Alternative splicing (可变剪接): 有些pre-mRNAs 可以通过不同的剪接方式产生不同的成熟的mRNA. 60% of the human genes are spliced in this manner. hnRNA hnRNA (heterogeneous nuclear RNA):核内不均一RNA，是mRNA的原初转录产物在核内形成的大小不等的中间物，相对分子质量大，也不均一，成为hnRNA。 hnRNA与mRNA的关系： 两者具有部分相同的序列； 两者都可以做翻译的模板； 两者都有5-端帽子和3-端polyA尾巴； 两者都是由RNA聚合酶转录 hnRNP hnRNP:核糖核蛋白颗粒 hnRNA的物理结构是核糖核蛋白颗粒(hnRNP)，颗粒中蛋白质包围着hnRNA，这种hnRNA和蛋白质组成的复合物称为hnRNP。 1. mRNA 加帽 帽子结构 (m7GpppGp-) 7-甲基鸟核苷三磷酸:它由甲基化鸟苷酸经焦磷酸化与mRNA的5‘末端核苷酸相连，形成5’,5‘-三磷酸连接(5’,5‘-triphosphate linkage)， mRNA5’端的这种结构称为帽子(cap)。 反应空间：在mRNA的5‘-端加上m7GTP的结构。此过程发生在细胞核内，即hnRNA即可进行加帽。 加工过程:首先是在磷酸酶的作用下，将5-端的磷酸基水解，然后再加上鸟苷三磷酸，形成GpppN的结构，再对G进行甲基化。 加帽的顺序 帽子的类型 在末端鸟苷的第7位上存在单个甲基化位点的称O类帽子（capO）； 在次末端核苷酸的核糖上的2′-O位点上还有一个甲基位点的称1类帽子(cap 1)； 此外，在第三个核苷酸的核糖上（2′-O）有甲基化位点的称2类帽子（cap2）。 这三种帽子都有特殊面对面核苷酸结构（confronted nucleotide structure）。 mRNA 5端的帽子位置和可被甲基化的位点 三种5’帽结构形式 帽子结构的功能 有助于mRNA跨越核膜转运; 保护 mRNA 5′不被酶降解； 使mRNA能与核糖体小亚基结合； 被蛋白质合成的起始因子所识别，促进蛋白质合成; 提高剪接效率 多聚腺苷化的信号及参与的蛋白因子 有效的信号是：AAUAAA及随后的23-24nt的富GU区，再后的富U区。 参与的蛋白因子： CPSF，CstF，CFI，CFII 3 ?端添加多聚腺苷酸 长度：20～200 nt 加尾信号： 切割与加尾： a. 剪切/多聚腺苷酸化特异性因子（cleavage and polyadenylation specificity factor, CPSF） b. 剪切刺激因子（cleavage stimulation factor, CstF） c. 剪切因子I，II（CFI， CFII） d. poly(A)多聚酶（polyadenylate polymerase, PAP） e. poly(A)结合蛋白（poly (A) binding protein, PBP） mRNA的多聚腺苷酸化过程 CPSF因子专一性与加尾信号AAUAAA结合 CstF因子与富GU区结合 CFI、CFII在加尾信号下游的15～25 nt处切割 poly(A)多聚酶催化多聚腺苷酸化，先添加约10个腺苷酸，速度较慢 poly(A)结合蛋白的结合加快多聚酶延伸速度，控制多聚腺嘌呤尾巴的长度 3 ?端多聚腺苷酸尾巴的功能 提高mRNA的稳定性 在核－质转运中起作用 提高mRNA的翻译效率 影响最后一个内含子的切除 创造终止密码子UGA 选择性加尾调节基因的表达 3. RNA剪接(Splicing) 真核生物mRNA前体的剪接 mRNA前体的加工内容： 3. 内含子的剪接 1. 5 ?端添加帽子结构 2. 3 ?端添加多聚腺苷酸 断裂基因发现不久，Crick（1978年）提出了一系列发人深思的问题： （1）剪切作用