Ataxin-3对Parkin (C289G)的作用及其与去泛素化酶活性的关系.pdfVIP

目 录 Ataxin-3 对 Parkin （C289G ）的作用及其与去泛素化酶活性的关系…4 中文摘要………………………………………………………………………4 ABSTRACT…………………………………………………………………6 英汉缩略词对照表…………………………………………………………9 前言…………………………………………………………………………10 1 材料与方法………………………………………………………………13 1.1 实验材料与仪器…………………………………………………13 1.2 实验方法……………………………………………………………14 1.3 统计方法……………………………………………………………16 2 结果 ………………………………………………………………………17 2.1 Parkin 在 HEK293T 细胞中的亚定位及与线粒体的共定位……17 2.2 Ataxin-3与Parkin 突变型（C289G）在HEK293T 细胞中的共定位……18 2.3 Parkin 突变型 （C289G）与线粒体在HEK293T 细胞中的共定位……21 3 讨论… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … 25 3.1 帕金森疾病的发病机制的探讨………………………………………25 3.2 野生型和PolyQ 突变型ataxin-3 蛋白对突变型Parkin （C289G）蛋白 细胞质聚集倾向的影响及其与去泛素化酶活性的关系…………………27 3.3 野生型和PolyQ 突变型ataxin-3 蛋白对突变型Parkin （C289G）蛋白 线粒体分布的影响及其与去泛素化酶活性的关系………………………28 4 结论 ………………………………………………………………………31 参考文献……………………………………………………………………32 综述…………………………………………………………………………37 攻读学位期间发表的学术论文目录………………………………………49 致谢…………………………………………………………………………50 3 Ataxin-3 对Parkin （C289G）的作用及其与 去泛素化酶活性的关系 中 文 摘 要 目的：观察野生型和PolyQ 突变型 ataxin-3 蛋白对突变型 Parkin （C289G）蛋白细胞质聚集倾向和线粒体分布的影响及其与去泛素化酶活性 的关系。 方法： 1.应用免疫荧光-激光共聚焦技术观察野生型或PolyQ 突变型ataxin-3 蛋白对突变型Parkin （C289G）蛋白在细胞质中聚集的影响及其与去泛素化 酶活性的关系； 2.应用免疫荧光-激光共聚焦技术观察野生型或PolyQ 突变型ataxin-3 蛋白对突变型Parkin （C289G）蛋白向线粒体转移能力的影响及其与去泛素 化酶活性的关系。 结果： 1.免疫荧光-激光共聚焦结果显示无论是在共转 ataxin-3-Q22 或 ataxin-3-Q68 与Parkin 突变（C289G）组，还是共转 ataxin-3-Q22-C14A 或ataxin-3-Q80-C14A 与Parkin 突变（C289G）组，ataxin-3 都能与Parkin 突变（C289G）共定位,说明ataxin-3 与Parkin 突变（C289G）之间可能有 相互作用。 2. 免疫荧光显示突变的 Parkin （C289G）蛋白在细胞质中出现显著聚 集，而共转ataxin-3-Q24 或ataxin-3-Q68 和Parkin 突变（C289G），Parkin 突变（C289G）蛋白聚集体数量均明显减少(P0.05)，且 ataxin-3-Q24 作 用更为明显(P0.05)，说明无论是ataxin-3-Q24 还是 ataxin-3-Q68 均显 4 著抑制了Parkin 突变（C289G）的聚集，而ataxin-3-Q24 的作用更为明显。 3.当 ataxin-3 发生 C14A 突变后，共转 ataxin-3-Q22-