Survivin反义寡核苷酸树形分子载体的构建及其对肝癌细胞凋亡的影响.pdfVIP

中国肿瘤生物治疗杂志 · 540· Chinese Journal of Cancer Biotherapy Vo1．14 No．6 Dec．2o07 [文章编号] 1007—385X(2007)06-0540-05 ·论 著· Survivin反义寡核苷酸树形分子载体的构建及其对肝癌细胞凋亡的影响 姚 航 ，岳隧岩 ，金跃明 ，潘碧峰 ，高 峰 ，崔大祥 (i．江苏省镇江市第三人民医院普外科，江苏镇江 212001；2．上海交通大学微纳米科学技术研究院生物纳米工程研究室，上海 200030) [摘 要] 目的：研究聚酰胺(polyamidoamine，PAMAM)树形分子高聚合物作为survivin反义寡核苷酸(survivin antisense oligodeoxynucleotide，survivin—asODN)载体传递系统的可行性以及对肝癌SMMC一7721细胞凋亡的影响。方法：将200 g／L survivin—asODN和3．66 g／L PAMAM混合制备PAMAM反义基因复合物，同时制备阳离子脂质体反义基因复合物作为对照。 透射电镜观察复合物的形态、粒径，Zeta电位分析仪测定复合物的zeta电位，离心法和紫外分光光度仪测定复合物的包封率、 载药率和体外DNA释放速度。将上述两种基因载体复合物转染肝癌SMMC一7721细胞，测定其转染效率；Western blotting检测 转染后肿瘤细胞中survivin蛋白的表达；流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡率。结果：成功制备PAMAM反义基因载体系统 PAMAM—survivin—asODN。该复合物的粒径小于脂质体一survivin—asODN复合物的粒径[(64．9．4-9．60)粥(193．9±32．20)nm， P0．01]，但zeta电位高于后者[(37．7±3．80) (22．6±2．20)mV，P0．05]；两者基因载药率、包封率无显著差异； PAMAM反义基因复合物对DNA持续释放达14 d，但脂质体复合物只持续5 d。PAMAM—survivin．asODN转染肝癌细胞的效果 强于脂质体一survivin—asODN(P0．05)。转染后肝癌细胞siurvivin蛋白的表达显著低于脂质体复合物[(26．80-4-5．65)粥 (36．96-4-5．89)，P0．05]，该细胞的凋亡率显著高于脂质体复合物转染细胞[(60．3-4-8．25)％ (48．7-4-9．39)％，P 0．05]。结论：PAMAM作为载体系统能将survivin—asODN高效递送到肝癌SMMC．7221细胞，诱导人肝癌细胞的凋亡。 [关键词] 聚酰胺树形分子高聚合物；反义寡核苷酸；survivin基因；肝癌；凋亡 [中图分类号] R735．7；R730．54 [文献标志码] A Construction of survivin antisense oligodeoxynucleotide polyamidoamine carrier and its influence on apoptosis of hepatic cancer cells YAO Hang’ YUE Sui—yan’ JIN Yue—ming’，PAN Bi．feng ， ， ， GAO Feng ，CUI Da．xiang (1．Department of General Sur． gery，the Third Hospital of Zhenjiang，Zhenjiang 2 1 200 1，China；2．Department of Bio—Nano—Science and Engineering， Institute of Micro—Nano ScienceTechnology，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200030，China) [Abstract] objective：To investigate the feasibility of using p0lyamid0amine(PAMAM)dendrimer as survivin antisense 0lig0de0xynu