尿液和唾液二、生物样品分析前处理技术三、定量分析方法的验证.ppt

本节总结 一、常用样品的种类、采集和贮藏 包括各种体液和组织。在体内药物分析中常用的是血液、尿液和唾液 二、生物样品分析前处理技术 三、定量分析方法的验证 谢谢 定量下限 定量下限至少能满足测定3～5个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/10～1/20时的药物浓度，且准确度应在真实值的80%～120%内。 RSD 应小于20%，S/N 应大于5. 应由至少51个标准样品测试结果证明。 样品稳定性 对含药生物样品在室温、冰冻、冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品存放时间和条件。注意考察储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析物的稳定性。 提取回收率 应考察高、中、低3个浓度的提取回收率。其结果应一致、精密和可重现。 质控样品 系将已知量的待测药物加入到生物介质中配制的样品，用于质量控制。 质量控制 在分析方法确证后开始测试未知生物样品，每个样品一般测定一次，必要时进行重复。 每个分析批应建立相应的标准曲线，并随行测定高、中、低3个浓度的QC样品，每浓度至少2样本。 若一个分析批中未知样品较多，应增加各浓度的QC样品数，使QC样品数大于未知样品总数的5%。 QC样品测定结果的可接受标准为：偏差应小于15%，低浓度点偏差小于20%，最多允许1/3不在同一浓度的QC样品结果超限。 如QC样品测定结果不符合要求，该分析批未知样品测试结果作废。 浓度高于定量上限的未知生物样品，应采用相应的空白介质稀释后重新测定。 测定结果 应详细描述所用的分析方法； 引用已有的参考文献； 提供每个分析批的标准曲线，质控样品及未知样品的测试结果及计算过程； 提供全部未知样品分析的色谱图，包括全部相关的标准曲线、质控样品色色谱图。 1-02生物样品分析方法的基本要求 一、常用样品的种类、采集和贮藏 *生物样品：包括各种体液和组织。在体内药物分析中常用的是血液、尿液和唾液。 血样 包括血浆、血清和全血。其中血浆（plasma）和血清（serum）为常用生物样品。 测定血中的药物浓度通常是指测定血浆或血清中的药物浓度，而非全血中的药物浓度。 供测定用血样的采集：动物实验时，可从动脉或心脏取血；对与患者或志愿者，采取静脉血（或用毛细管采血）。 血浆的制备：将采取全血置于含有抗凝剂（如肝素、草酸盐、EDTA等）的试管中，混匀后，以2500～3000r/min离心5min使血浆与血细胞分离，上清液为血浆。 血清的制备：将采取全血在室温下放置0.5～1小时，待血液凝固后，用细玻棒剥离血饼，以2000～3000r/min离心5～10min，上清液为血清。 药物与纤维蛋白几乎不结合，血浆与血清中的药物浓度测定值通常是相同的。但血浆比血清分离快，且制取的量多，所以血浆较血清更常用。 血样采取后，应及时分离血浆或血清，并立即进行分析。如不能立即测定，应置于具塞硬质玻璃管或聚乙烯塑料离心管中密塞保存。 短期保存时，可置于冰箱冷藏（4?C）；长期保存需在-20?C或-80?C下冷冻贮藏。 唾液 由腮腺、额下腺、舌下腺和口腔粘膜内腺体分泌液混合组成的。口腔粘膜受化学刺激，各唾液腺的分泌会受到影响，造成唾液组成发生较大变化。 唾液的采集：在安静状态下进行，漱口后15分钟收集；采集后立即除去泡沫，并以3000r/min离心10分钟，取上清液分析。 若分泌量少，可转动舌尖促进唾液分泌，也可采用物理的（如嚼石蜡）或化学的（如酒石酸）方法刺激。但经刺激后唾液中的药物浓度会受影响。 唾液采集后，应在4?C以下保存。 尿液 其主要成分：水、含氮化合物（大部分为尿素）及盐类。 体内药物（原型或代谢物及其缀合物）的清除主要通过尿液排出。 尿液中药物浓度高，采集方便、且采集量大。但尿液浓度变化较大。尿液中药物浓度的改变不能直接反应血药中的浓度。 尿液测定主要用于药物剂量回收，尿清除率、生物利用度、以及药物代谢及其代谢途径、类型、速率等的研究。 采集的尿液是自然排尿。 测定尿中药物的总量时，应收集用药后的一定时间内（如8h、12h或24h）排泄的全部尿液，记录体积后，量取一部分用于药物浓度的测定，在乘以尿量求得排泄总量。 肾功能不良者不宜采集尿样。 尿液采集后应立即测定，否则应加入防腐剂后置于冰箱中保存。 常用防腐剂：甲苯、二甲苯、三氯甲烷，以及醋酸、盐酸等。 二、生物样品分析前处理技术 **生物样品的前处理应主要考虑生物样品的种类、被测药物的性质和所采用的测定方法。 依据生物样品类型： 血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出。 唾液样品应采用离心去除粘蛋白。 尿液样品常采用酸或酶水解药物使从缀和物中释出。 依据被测药物的结构及性质，以及存在形式： 药物的酸碱性与溶解性涉及药物的萃取手段。 是