植物学大实验课件(实验二).ppt

第一部分：逆境对植物的伤害 实验二：植物组织中丙二醛含量的测定 实验三：电导仪法测定逆境对植物细胞膜的伤害 实验四：植物组织中氧自由基含量的测定 实验五：植物组织中过氧化氢含量的测定 实验二：植物组织中丙二醛含量的测定 丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境 条、件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生 过氧化反应而产生的。它的含量与植物衰老 及逆境伤害有密切关系。 实验二：植物组织中丙二醛含量的测定 一、实验目的 通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定 的原理及方法。了解逆境条件下植物的受 害情况。 二、原理 三、仪器设备 四 实验药品 10%三氯乙酸（TCA）； 0.6%硫代巴比妥酸：先加少量的氢氧化钠 （1mol/L）溶解，再用10％的三氯乙酸定 容； 五、实验材料 逆境胁迫下的植物叶片（以正常条件下为对 照） 六、实验步骤 1. 两个处理：对照，低温 2. MDA的提取 称取剪碎的试材0.5g左右，加入1ml 10％TCA研磨至匀浆，再加4ml TCA进一步研磨，匀浆离心4000g10min，上清液为样品提取液。 3. 显色反应和测定 吸取离心的上清液2ml（对照加2ml蒸馏水），加入2ml0.6%TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心。取上清液测定532nm、600nm和450nm波长下的吸光度。 七、计算 以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，按155mmol-1cm-1消光系数计算MDA含量。 分别计算衰老和对照组的值。 MDA浓度(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450 MDA含量(μmol/g FW)＝ D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的光密度值。 八、思考题 1.通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？ 2.说明膜脂过氧化作用的对植物的影响。 3.正常植物与衰老时相比丙二醛含量有什么变化，分析其原因。 * * 植物学大实验 姚晓芹、赵金莉、郭辉娟 yaoxiao301@126.com 硫代巴比妥酸 TBA 丙二醛 3,5,5′-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川） 逆境 膜脂的过氧化作用 丙二醛 粉红色 酸性 532nm吸收峰 调“0” 调“100” 测定 722S使用 *