江淮地区间日疟原虫乳酸脱氢酶基因多态性研究.pdfVIP

安徽医科大学硕士论文 目录 一、 中文摘要 1 二、 英文摘要 2 三、 前言 4 四、 材料与方法 7 1、 实验材料 7 2 、 实验方法. 11 五、 结果 17 六、 讨论 31 七、 结论32 八、 参考文献33 九、 附录 1、 本人简历38 2 、 在学期间研究成果目录38 3 、 英文缩略词表39 十、 致谢 40 十一、 综述及参考文献41 - 江淮地区间日疟原虫乳酸脱氢酶基因多态性研究 中文摘要 目的：分析江淮地区间日疟原虫乳酸脱氢酶基因(Plasmodium vivax lactate dehydrogenase. PvLDH)序列特征，以及是否存在多态性，研究其作为靶抗原在疟 疾诊断和新药筛选中的意义及应用前景。 方法：1、在安徽省蚌埠市区、五河县、利辛县等地采集间日疟患者末梢血，制 备厚薄血片及干血滤纸片。用QIAamp DNA mini kit (QIAGEN，德国)试剂盒提取 干血滤纸片间日疟原虫基因组DNA （gDNA ）39 份，所有样本经染色镜检和PCR 检测鉴定均为单纯间日疟原虫。2、根据GenBank 数据库中间日疟原虫 Belem 株 LDH 基因序列(NCBI No:DQ060151)设计引物，以提取的间日疟原虫基因组DNA 为模板，PCR 扩增LDH 基因，产物经琼脂糖凝胶电泳纯化回收后连接至pGEM-T 质粒，转化E.coli DH5α 菌株后挑取菌落进行PCR 鉴定，将初步筛选的阳性克隆 进行测序，最后通过Blast 等方法进行序列的比对分析。 结果：39 份患者血样经病原学染色镜检和PCR 检测均为单纯间日疟原虫感染，未 发现恶性疟原虫等其他疟原虫的单纯或合并感染。扩增的 PvLDH 编码基因克隆 至T 载体后测序显示目的片段大小均为951bp，且39 份样本PvLDH 核苷酸序列 均无差异。通过BLAST 方法对克隆的PvLDH 基因序列进行比对分析，发现江淮 地区间日疟原虫与Sal-I 株、Belem 株、萨尔瓦多株、EJEU60134 株、MIMO612514 株、ASAO6G29643 株、ASAO6R09632 株、MIAO61042 株的LDH 基因同源性高 达99.7%-99.9%， 只有1-3 个碱基的差别；对PvLDH 的氨基酸序列进行比对分 析，结果发现江淮地区间日疟原虫与Sal-I 株、Belem 株等株间日疟原虫的LDH 蛋 白序列同源性为100%，与EJEU60134 株、MIAO61251 株的同源性为为99.7%， 仅有1 个氨基酸的差异。 结论：江淮地区间日疟原虫乳酸脱氢酶基因序列具有高度保守性，与 Sal-I 株、 Belem 株等基因序列比对分析LDH 基因同源性达99.7%-99.9%，氨基酸序列比对 分析基本为同义突变，仅与EJEU60134 株和MIAO6125 1 株有一个氨基酸的变化， 该研究为间日疟原虫诊断试剂的研制提供了的一定的理论依据。 关键词：间日疟原虫；乳酸脱氢酶；基因多态性 1 安徽医科大学硕士论文 A Study of Polymorphism of Lactate Dehydrogenase(LDH) Gene of Plasmodium vivax from JiangHuai Region ABSTRACT Objective: To analyze the nucleotide sequences features and genetic polymorphisms of lactate dehydrogenase of Plasmodium vivax (Ji