激活的Rap1和H-Ras对E-Cadherin介导的细胞间粘附连接的调节.pdfVIP

Classified Index: Q71 U.D.C: 577.21 Dissertation for the Master Degree in Science THE REGULATION OF E-CADHERIN- MEDIATED CELL ADHERENT JUNCTIONS BY THE ACTIVATION OF RAP1 AND H-RAS Candidate ： Shouchao Zhang Supervisor ： Prof. Shuliang Shi Academic Degree Applied for ： Master of Science Speciality ： Biology Affiliation ： School of Life Science and Technology Date of Defence ： June, 2013 Degree-Conferring-Institution ： Harbin Institute of Technology 摘 要 摘 要 粘附连接是E-cadherin （E-钙粘蛋白）介导的上皮细胞间粘附结构，其胞外 部分是反式相互作用的 E-钙粘蛋白，胞内通过 p120-连环蛋白(p120-catenin) 、 β-连环蛋白(β-catenin) 结合到肌动蛋白细胞骨架上。粘附连接不仅将相邻细胞 依次连接起来，维持上皮细胞正常的形态和极性，而且参与细胞间及胞内的信 号转导，具有抑制肿瘤发生和转移的功能。Ras 家族小分子量G 蛋白对E-钙粘 蛋白有重要的调节作用，Rap1 调控 E-钙粘蛋白介导的粘附连接的形成和定 位，但此过程中Rap1 作用的下游信号通路仍是未知的。有文献报道抑制H-Ras 的活性能增强E-钙粘蛋白的表达，小鼠胚胎成纤维细胞缺乏H-Ras 时表现出较 低的增殖和迁移能力，但H-Ras 对E-钙粘蛋白是否具有调节作用尚未定论。为 阐明 Rap1 和 H-Ras 能否协同或拮抗地调节 E-钙粘蛋白介导的粘附连接的形 成，我们使用Ca2+开关模拟粘附连接解体和重建模型，利用GST-Pull down 技 术研究了Rap1 和H-Ras 活性在粘附连接重建过程中的变化规律，发现MCF-7 细胞中 Rap1 和 H-Ras 在 Ca2+饥饿引起的粘附连接解离时均被激活。此外，通 过Co-IP 技术研究了Rap1 和H-Ras 在粘附连接重建过程中相互作用蛋白的变化 情况，通过 FRET 技术研究了 Rap1 和 H-Ras 在细胞内被激活的位置，研究发 现，Rap1 和 H-Ras 的激活均与 Ca2+开关实验介导的粘附连接重建有关。Rap1 调节E-钙粘蛋白的候补下游因子主要是一些细胞骨架蛋白、细胞骨架调节蛋白 以及小分子量 G 蛋白的GAPs ，H-Ras 调节 E-钙粘蛋白的下游因子可能也包括 一些细胞骨架蛋白。Rap1 起始活化时核周围的活化水平高于细胞膜处，细胞 膜和胞质中的H-Ras 活性化水平均在粘附连接解体时上升，粘附连接重建时下 调。 通过本课题的研究，我们能够进一步了解 Rap1 和 H-Ras 之间的联系以及 调控E-钙粘蛋白介导的细胞间粘附连接的分子机理。 关键词：Rap1 ；H-Ras ；E-钙粘蛋白；粘附连接；Ca2+开关实验 - I - Abstract Abstract Adherent junction is the epithelial adhesion structure mediated by E-ca