硼替佐米对K562细胞增殖、凋亡及其对XIAP表达的影响.pdfVIP

摘要 I AP 硼替佐米对K562细胞增殖、凋亡及其对X 表达的影响 研究生 邵明 导师 孙玲 郑州大学第一附属医院血液科 郑州450052 摘 要 目的 泛素．蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasomepathway,UPP)是生物体内蛋白质 选择性降解的重要途径，可影响基因表达调控、细胞周期、氧化应激反应等多 种细胞活动【l】。蛋白酶体活性的异常改变，可引起多种蛋白质降解异常，导致细 胞功能紊乱，使肿瘤细胞持续生长，是肿瘤发生的标志之一。蛋白酶体抑制剂 特异性地抑制蛋白酶体活性，阻止肿瘤生长、粘附及血管生成【2】，可以作为抗肿 的，可逆性的蛋白酶体抑制剂，通过抑制多种蛋白质的降解，可以稳定p21， and 一些Bcl．2家族成员(女HBakBax)[34】。在生理情况下NF．r．B在胞质中与抑制蛋 白Ird3结合，硼替佐米通过抑制I佃的降解，下调NF—r．B的活性，不但可以增加 肿瘤细胞的凋亡【5,6,7】，还可以增加肿瘤细胞对化疗、放疗阳1、免疫治疗的敏感 linkedinhibitorof chromosome 性∞1。X连锁凋亡抑制蛋白(X protein， apoptosis XIAP)是内源性凋亡抑制蛋白家族(inhibitor 达到抑制凋亡的作用。XIAP的表达受多条信号转导通路的影响，NF．rd3，P13K 胞株及急性白血病原代细胞中高表达【1¨，这提示XIAP可能与白血病的发生、病 摘要 程演变及预后等密切相关【12】。本研究观察硼替佐米对K562细胞增殖、凋亡及 XIAP基因和蛋白表达的影响，研究硼替佐米对白血病细胞的作用及其与XIAP 之间的关系，为其做为新的抗白血病药物提供实验依据。 方法 并找出硼替佐米作用于K562细胞的最适时间及作用浓度。 瑞氏染色观察细胞生长状态及形态学变化。 AnnexinV FITC／PI双标检测细胞凋亡率。 米处理K562细胞24h后，TUNEL技术检测细胞的凋亡情况。 5．RT．PCR法检测XIAP RT．PCR法检测硼替佐米对K562细胞XIAP mRNA表达的影响。 细胞24h，免疫组化法检测硼替佐米对K562细胞XIAP蛋白表达的影响。 7．统计分析：所得结果应用SPSSl3．0统计学软件处理，对计量资料，同一时间点 各实验组与对照组之间比较用两样本t检验，计数资料采用z’检验，统计学数 结果 (28．7+0．49)％、(55．4+1．1 组比较存在显著差异(PO．01)；硼替佐米组间两两比较，具有显著性差异 (PO．05)，其24小时IC50为24．6 摘要 理K562细胞24h，瑞氏染色，光学显微镜下示硼替佐米组细胞呈现凋亡形态 学改变，表现为染色质浓缩，核固缩、核边集、核碎裂，胞质中见大量空泡 及凋亡小体形成；正常对照组细胞形态正常。TUNEL法计数300个细胞中阳 性细胞数为147，阳性率为49．O％，与空白对照组(阳性细胞数7，阳性率2．3％) 进一步行组间两两比较，有显著统计学差异(PO．05)。 50nmol／L、1 RT-PCR 00nmol／L的硼替佐米分别作于K56