血流感染实验室诊断研究.ppt

血标本分子检测 种特异性、属特异性、广谱、多重PCR、微阵列分析 血培养阴性的苛养菌，如Bartonella spp.巴尔通体, Coxiella burnetii伯氏考克斯体, Mycoplasma spp.支原体, Chlamydia spp.衣原体, Ricketssia spp.立克次体，Tropheryma whipplei 商品化分子生物学检测方法:血标本 SeptiFast?(Roche)：multiplex real-time PCR，种属特异性荧光探针，检测重要血流感染致病菌 SepsiTestTM? (Molzym)：eubacterial and panfungal real-time PCR， a 16S and 18S rRNA gene-based universal PCR+ sequencing，几乎可以鉴定所有细菌、真菌 VYOO? (SIRS Lab)：multiplex PCR，检测重要血流感染菌，电泳分离扩增片段 Plex-ID? (Abbott)：eubacterial and panfungal PCR+质谱，几乎可以鉴定所有细菌、真菌 * Intensive Care Med. 2011 May, publish online. SeptiFast test检测的病原谱 BMJ Open 2012;2:e000392 Intensive Care Med (2010) 36:49–56 SeptiFast test评估 Intensive Care Med (2010) 36:49–56 SeptiFast与PCT、CRP相关性 Langenbecks Arch Surg (2012) 397:447–455 VYOO?检测能力评估 PLoS ONE. 2012,7 : e38916 Sepsis 非感染SIRS 血培养阳性 血培养阴性，其它标本培养阳性 Sepsis,所有培养阴性 VYOO? 与微生物学一致性为46.2% 仍需改进 PLoS ONE. 2012,7 : e38916 3种商品化PCR检测系统比对 Med Klin Intensivmed Notfmed 2013 3种商品化PCR检测系统比对 Med Klin Intensivmed Notfmed 2013 分子生物检测血标本 几乎所有与血培养对照的研究，都显示更高的敏感性，但并非所有血培养阳性菌一定能检测出来 不可替代血培养！ 相较于血培养，其高敏感性可以更早地开始抗菌治疗，或改变治疗方案 污染导致的假阳性无法排除！ 评估血培养阴性的PCR阳性结果 分析其它微生物检查结果（如BALF，伤口拭子等） 免疫反应指标 * Intensive Care Med. 2011 May, publish online. 小结 BSI发病率逐年升高，尤其是革兰阳性菌和真菌 BSI病原菌耐药率持续升高 优化血培养流程，提高阳性率，降低污染率 结合临床分析血培养结果 分子生物学技术快速诊断BSI，MALDI-TOF MS、商品化多重PCR检测平台、PNA-FISH成为未来发展方向 血培养不可被分子方法取代！ 谢谢！ J. Clin. Microbiol. 2011, 49(12):4047 Routine Set @ Mayo Clinic: 2 BACTEC Aerobic Plus Bottles + 1 BACTEC Anaerobic Lytic Bottle 采血量和阳性率 * 非条件致病菌 * 在多次血培养中单次培养下列细菌阳性 凝固酶阴性葡萄球菌 棒状杆菌 微球菌 丙酸杆菌 芽孢杆菌 如多次培养阳性，可能为条件致病菌，需结合临床分析 血培养污染菌 非条件致病菌 Mayo Clinic (p0.001) 为什么需氧+厌氧？ * 两种组合均能检测 不同的病原菌 J. Clin. Microbiol. 2011, 49(12):4047 表皮葡萄球菌血培养阳性意义 CID 1997 血培养阳性时间－凝固酶阴性葡萄球菌 96%(+) 86%单瓶（＋） 需氧瓶＝242 厌氧瓶＝72 需＋厌＝150 血培养阳性时间－金黄色葡萄球菌 如何分析血培养凝固酶阴性葡萄球菌？ University Hospital of Base，2003－2007 3060阳性血培养，654CNS，粒缺患者除外 232 (35%)真正BSI，422 (65%)污染 BSI由感染科医生判断，至少一份血培养CNS阳性，有感染临床表现 SIRS: 体温38C or 36C; 心率90/min; 呼吸 20/min; 白细胞12 or 4 G/L or 10% 未成熟中性粒细胞 32%患者有1瓶以上CNS阳性，BSI68 %，