光叶海桐愈伤组织诱导及增殖研究.pdfVIP

2007年11月 绵阳师范学院学报 NOV．．2007 第26卷 第11期 Journal of Mianyang Normal Universi Vo1．26 NO．11 光叶海桐愈伤组织诱导及增殖研究 蒋炜 ，苏智先 一，陈光登 (1．西华师范大学生物多样性研究中心，四川省环境科学与生物多样性保护重点实验室，四川南充 637002； 2．四川省生态学与环境保护技术重点实验室，四川绵阳 621000) 摘 要：以光叶海桐的叶和茎为外植体，进行了组织培养愈伤组织诱导的实验研究。结果表明：在以MS培养 基和WPM培养基为基本培养基附加不同外源激素2，4一D、NAA、KT、BA条件下，光叶海桐在一个较宽的生长范围 内，均可诱导产生愈伤组织。最佳诱导和增殖条件是MS+2，4一D(1．5mg／L)+BA(1．Omg／L)光、暗交替(光照 14h／d)。在此条件下，30d后，叶的诱导率达90％，愈伤组织继代培养14d后，平均增殖率达198．8％。 关键词：光叶海桐；愈伤组织诱导；植物激素；增殖条件 中图分类号：Q943．1 文献标识码：A 文章编号：1672-612x(2007)11-0061-05 光叶海桐(Pittosporum glabratum Lirut1．)为海桐花科植物，主要分布于广东、广西、湖南、四川、贵州、山 西等地，香港的大帽山和嘉道理农场暨植物园也有少量分布¨J。中国医书对其种子(山枝仁)和根皮(山枝 根)的功用及用途有详细记载，其中山枝仁有清热、生津止渴之功效，可治虚热心烦、口渴咽痛等病症，山枝 根有补脾肾、祛风湿、活血通络之功能，可虚劳喘咳、咽痛、牙痛、腹痛、关节痛等 ]。光叶海桐茎叶醇提取 物具有显著的镇痛作用l3 J。文献报道，从海桐花科植物提取的抗肿瘤物质与从其他植物提取的活性成分 相比，对变性的细胞有较好的选择性和较低的毒性 J。但天然植物体内化学成分的含量较低，要提取其化 学成分就要大量开采光叶海桐植株，这会对生态平衡造成一定的破坏。随着生物技术的发展，通过植物组 织培养方法，可以生产天然的植物成分并提高某些植物成分的含量，如通过对红豆杉(Taxus chinensis ( )Rehd．)愈伤组织培养，使紫杉醇及三尖杉醇的含量均高于外植体的含量 J。目前，有关光叶海桐愈 伤组织培养国内外尚未见公开报道。本研究对光叶海桐愈伤组织诱导进行了初步探索，获得了光叶海桐 愈伤组织诱导及增殖的适宜培养条件，为建立大规模细胞培养生产光叶海桐有效药用成分提供了必要前 提条件。 1 材料与方法 1．1 材料 愈伤组织培养所用的外植体来自于西华师范大学校园内种植的光叶海桐。 1．2 愈伤组织的诱导与培养 1．2，1 外植体类型和接种方法 于3～4月陆续从母株上采取嫩枝和嫩叶，自来水冲洗lh，双蒸水清洗外植体后，放人培养皿内，酒精 擦拭后放人超净工作台。70％乙醇浸泡消毒30s，双蒸水清洗4次。次氯酸钠浸泡1—10min(视材料的幼 嫩程度而定)，放人培养皿中双蒸水清洗数次。剪取茎段(0．5cm～1cm)、叶片(0．5cm×0．5cm)接种到培 养基上。 1．2，2 培养基 收稿日期：2oa7 也1 基金项目：国家自然科学基金项目；四川省科技厅应用基础项目(05JY029—107)；四川省林业厅科技先导计划重点项目(O6— 3—5) 作者简介：蒋炜(1982一 )，男，硕士研究生，主要研究方向：组织培养。 }通讯作者：E—mail：ZXSU@mnu、edu．cn · 62· 绵阳师范学院学报(自然科学版) 第26卷 选用基本培养基MS和WPM，分别添加不同浓度的生长素2，4一D、NAA和细胞分裂素BA、KT，30g／L 蔗糖，8g／L琼脂，0．1mol／L NaOH和0．1mol／L HC1调节pH为5．8，高压(121℃)灭菌15min。 1．2．3 培养条件 置于HPG一280H人工气候箱内培养，温度为(24 4-2)℃。诱导过程光照条件分两种处理：24h暗启动 培养后光、暗交替培养(14h光照，10h黑暗)，光照强度20001x；全程黑暗培养。