基质金属蛋白酶和促血管生成素在垂体腺瘤中的表达及意义.pdfVIP

中文摘要 坏基底膜和细胞外基质，从而促进肿瘤的侵袭与转移：最近 发现舢．9，Ang一1和Ang．2在颅内肿瘤的发生及侵润过程 中起着重要作用，但具体机理尚未完全阐明。 本试验通过检测侵袭性垂体腺瘤和非侵袭性垂体腺瘤 ● 水平；从而初步研究和探讨它们与垂体腺瘤及其侵袭性的关 遵‘ 系，为侵袭性垂体腺瘤的发生机理提供分子水平的理论依 据，并为临床治疗提供一条可能的新途径。 方法：垂体腺瘤组织标本来自于2003年1O月至2005 年9月间，河北医科大学附属第二医院神经外科手术切除的 40例垂体腺瘤。40例标本中，有24例女性，16例男性。 平均年龄为49．9岁(从17～67岁)。其中，11例为侵袭性 垂体腺瘤，29例为非侵袭性垂体腺瘤。 用免疫组织化学链霉素亲生物素．过氧化酶连接法 Peroxidase Method (Str印taVidin Conjugated SP法)对40 例垂体腺瘤组织标本表达的舢．9，Ang．1和Ang．2蛋白 进行检测：标本固定、包埋蜡块、切片；脱蜡和水化；抗原 修复；滴加正常山羊血清；滴加I抗50“1；滴加II抗50“l； 脱水、透明、封片、镜检。 采用逆转录．聚合酶链反应(ImPCR)的方法对其中11 达进行分析：垂体瘤细胞总IⅢA的提取：采用Trizol法提 取细胞总RNA；cDNA合成：逆转录反应体系1 5“l，包括细 胞总RNA 4“l，随机引物1“l，IUasinO．5“l，5×M．Ⅶ，V逆 V逆 转录反应缓冲液3pl，dNTP1．5“l，MgCl2O．5“l，M．MI 中文摘要 M．MLV逆转录酶；引物合成：引物序列检索自NCBI— 盛公司合成；PCR反应：反应体系25“l，扩增条件：均先采 性30秒，49℃退火30秒，72℃延伸3O秒，40个循环。Ang．2： 94。C变性30秒，48℃退火35秒，72℃延伸35秒，40个循 环。MMP．9：94℃变性30秒，56℃退火35秒，72℃延伸 3 5秒， 72℃延伸35秒，40个循环。产物分析：取25 IJLl扩增产物， 染色，紫外透射仪上观察结果同时应用读胶仪读取各条产物 带的光密度值并照相。 结果统计分析：测得数据用均数±标准差(x±s)表示。 应用统计分析软件SPSS11．O进行统计分析，免疫组化统计 相关分析。 结果：免疫组织化学结果显示：脚一9的表达主要定 位在肿瘤细胞细胞浆，Ang—l，Ang．2的表达主要定位在肿瘤 细胞和血管内皮细胞细胞浆，阳性皆呈棕黄色颗粒。脚．9 ·蛋白及Ang．2蛋白在侵袭性垂体腺瘤组中的表达明显高于非 1 1)和 侵袭性垂体腺瘤组(1．53士O．280；O．883土O．245 pO．O (1．455士O．280；O．935士O．291 pO．025)。Ang．1蛋白在侵袭性 垂体腺瘤组中的表达明显低刊E侵袭性垂体腺瘤组 8 (O．889士O．323；1．263士O．3 pO．O1)。N皿ⅥP-9和Ang一1