2种子制备和菌种保藏解决方案.ppt

9、基因工程菌的保藏 由载体质粒等携带的外源DNA片段通常是遗传不稳定的、且很易丢失其外源质粒复制子。质粒基因通常为宿主细胞生长非必需。 一般情况下当细胞丢失这些质粒时，生长速度会加快。 当培养基中加入抗生素时，抗生素提供了一有利于携带质粒的细胞群体的极有用的生长选择压。而且在运用基因工程菌进行发酵时，抗生素的加入可帮助维持质粒复制与染色体复制的协调。 我们建议基因工程菌应保藏在含低浓度选择剂的培养基中。 第四节 菌种保藏机构的简介 菌种是一个国家的重要生物资源，所以菌种保藏是一项重要的菌物学工作。随着科技的进步和生产的发展，对菌物资源的利用正在不断扩大，所以菌种保藏工作显得更加重要。 目的：广泛收集实验室和生产菌种，将它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、不乱和便于研究、交换、使用的目的。 以下是几个国际上规模较大的菌种保藏机构： 美国典型培养物保藏所 (ATCC，American Type Culture Collection，Maryland，USA) 美国农业部北方地区研究中心（NRRL，Northron Regional Reseach Center Laboratory，Agricultural Research Service. U.S. Department of Agriculture, Peria, Illinois,USA) 英联邦国际菌物研究所（CMI） 英国国家酵母菌保藏所（NCYC） 荷兰菌物菌种中心保藏所（CBS） 日本大阪发酵研究所（IFO） 中国典型培养物保藏中心 (CCTCC，China Center for Type Culture Collection） 是中国专利局指定的用于专利程序培养物的保藏机构，成为国内保存专利培养物数量最多，种类最全的保藏机构。 中国微生物菌种保藏中心 中心名称 缩写 所在地 邮码 保藏范围 中国典型培养物保藏中心 ? 普通微生物菌种保藏中心 ? ? 农业微生物菌种保藏中心 ? 工业微生物保藏中心 ? 医学微生物菌种保藏管理中心 ? ? 抗生素菌种保藏管理中心 ? ?? 兽医微生物菌种保藏中心 ? 林业微生物菌种保藏中心 ? CCTCC ? CCGMC ? ? ACCC ? CICC ? CMCC ? ? ? CACC ? CVCC ? CFCC 武汉大学 ? 中国科学院微生物研究所 中国科学院病毒研究所 ? 中国农业科学院 土壤肥料研究所 轻工部食品发酵工业研究所 中国医学科学院 皮肤病研究所 中国药品生物制品检定所 中国医学科学院 医药生物技术研究所 国家医药管理局 四川抗生素工业研究所 华北制药厂抗生素研究所 农业部兽医药品监察所 ? 中国林业研究所 武汉430072 ? 北京100080 武汉430071 ? 北京100081 ? 北京100027 ? 南京210042 北京100050 北京100050 ? ? 成都610051 石家庄050015 北京100081 ? 北京100091 专利菌种 ? 真菌，细菌 病毒 ? 农业微生物 ? 工业微生物 ? 真菌 细菌 抗生素产生菌 ? ? 新抗生素产生菌 抗生素工业生产菌种 ? 兽医微生物 ? 林业微生物 不同菌种孢子制备工艺 1. 放线菌类：孢子培养多数采用人工合成琼脂培养基，其中C、N源不需太丰富，N源相对C源要少一些，避免菌丝大量形成，以利于大量产生孢子。 培养温度：28℃，部分为30℃或37℃。 培养时间：因菌种不同而异，一般4-7天，也有14天。孢子成熟后，于4℃冰箱保存备用。 存放时间：一般1周内，少数可存放1-3月 2. 霉菌：孢子培养多数采用大米、小米、麦麸等天然培养基。首先将保存在冷冻管或沙土管中的孢子接种在斜面上恒温培养，待孢子成熟后制成孢子悬浮液，然后接种到大米或小米培养基，培养成熟后成为“亲米”，由“亲米”再转接到大米或小米培养基上，培养成熟后成为“生产米”。用“生产米”接入种子罐内。 培养温度：25-28℃ 培养时间：4-14天 制备好的大米或小米孢子，于5℃ 冰箱保存备用，或将大米或小米孢子中水分用抽真空至含水量10%以下保存备用。 3. 细菌类 在斜面上培养 培养温度：37 ℃ 时间时间：多为1-2天，产芽孢5-6天 * * 第三章 种子制备与菌种保藏 第一节 概 述 一、种子制备 种子制备是抗生素发酵生产的第一道工序，也是重要的工序。 定义：利用生产菌种，在一定的条件下，经过扩大繁殖，成为具有一定质量和数量的纯种，供给抗生素生产使用。 包括两个过程： 孢子制备：生产大量孢子 摇瓶种子制备：生产大量种子菌丝 又可分为：实验室制备阶段与生产车间制备阶段 二、菌种保藏 目的：保