沙门菌常用生化试验.ppt

沙门菌（Salmonella） 沙门菌生物学性状 大小0.6～1.0×2～3um，无芽孢，一般有鞭毛(鸡沙门菌除外)，无荚膜，多数有菌毛，革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性厌氧，最适生长温度为35～37℃，最适pH值为6.8～7.8。 病 原 学 流行病学 易感动物：各种年龄的动物均感染，幼畜最易感 传播途径： 主要消化道、呼吸道、伤口等 子宫内感染（垂直传播） 内源性感染（带菌现象普遍) 沙门氏菌属——致病性 国内外沙门菌检测方法（传统方法） 国家标准 行业标准 FDA （Food Drug Administration） AOAC (Association of Official Analytical Chemists) FSIS （FOOD SAFETY AND INSPECTION SERVICE） ISO 加拿大官方食品微生物分析方法 沙门菌常用生化试验 沙门菌常用生化试验 沙门菌常用生化试验 选择性增菌 含选择性抑制剂 1：1稀释液而不是1：10，提高检出率 肠道菌选择性培养基分离培养 SS平板 分离肠道致病菌的强选择培养基 SS平板组成 基础培养基 ＋ 乳糖 ＋ 抑制剂(胆盐、枸橼酸钠、0.1%煌绿水溶液) ＋ 指示剂(中性红) SS平板上肠道细菌的生长现象 肠道致病菌：不分解乳糖，菌落无色或淡黄色 肠道非致病菌：分解乳糖产酸，菌落呈红色 分离培养 取增菌液划线接种于SS琼脂平板，于37℃培养18～24h，观察菌落特征 肠道致病菌在SS平板上的菌落特征 沙门氏菌形成不发酵乳糖菌落 无色透明，光滑湿润、边缘整齐菌落 革兰染色 沙门氏菌：革兰阴性杆菌 1、三糖铁琼脂(TSI)成分 　　蛋白胨 20.0g　　牛肉膏　3.0g　　乳 糖 10.0g　　蔗　糖 10.0g　　葡萄糖　1.0g 　　硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g　　酚　红 0.025g或5g/L溶液5mL　　氯化钠　　5.0g 　　硫代硫酸钠0.5g　　琼　脂 12.0g　　蒸馏水 1000.0mL  TSI生化原理 斜面部分暴露于空气中，为有氧环境。而下部与空气隔绝是相对厌氧的环境。因此TSI时，最重要的是斜面部分和管下部琼脂的长度，两者均为3cm ，以保证两部分相对应的有氧或厌氧环境。 观察结果：有三种类型 A.非发酵型：无碳氢化合物发酵，所以无酸产生，斜面上琼脂的肽降解产物是碱性物质导致斜面变红。这种类型的细菌称为非发酵型。?? B.非乳糖发酵型:如果接种的是发酵葡萄糖不发酵乳糖的细菌，培养基内仅有0.1%葡萄糖可以产酸。开始阶段，培养8-12h时，产生的酸足以引起斜面和底部颜色变成黄色。在接下来的时间里，葡萄糖被完全消耗，斜面部分的细菌在有氧条件下开始氧化降解氨基酸，产生的胺类很快就中和斜面上存在的酸；到18-24h，整个斜面又转换成碱性PH，颜色有变成红色。深部（厌氧区域），氨基酸降解不足以中和形成的酸，培养基仍为黄色。 C.乳糖（蔗糖）发酵型 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果 肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表 结果报告 凡血清学鉴定与生化反应均符合沙门氏菌者 报告：×××食品检出沙门氏菌 反之则报告：未检出沙门氏菌 沙门菌仪器检测法 VIDAS（生物梅里埃公司） BAX （杜邦公司） 沙门菌仪器检测法 VIDAS 应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪 ，用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来捕捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合，经充分冲洗，通过激发光源检测，即能自动读出发光的阳性标本，其优点是检测灵敏度高，速度快，可以在48小时的时间内快速鉴定沙门氏菌、大肠杆菌O157：H7、单核李斯特菌，空肠弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。 VIDAS  沙门菌仪器检测法 DUPONT Qualicon BAX System 应用DNA分子核酸探针或基因探针技术制造的全自动PCR分析仪。将已知核苷酸序列DNA片段用同位素或其他方法标记，加入已变性的被检DNA样品中，在一定条件下即可与该样品中有同源序列的DNA区段形成杂交双链，从而达到鉴定样品中DNA的目的。 DUPONT Qualicon BAX System  商品化生化鉴定系统 VITEK GNI+ 应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试，卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定浓度的欲鉴定菌株的菌悬液，然后将菌悬液接种到各种细菌的小卡上，将其放入具有读数功能的孵箱内，每隔一定时间，仪器会自动检测培养基的发酵情况，并换算成能被计算机所接受的生物编码